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guangxidaxue金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助畢赤酵母電轉(zhuǎn)化問題
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酵母是GS115，載體pPIC9K，構(gòu)建成功后有11KB。SacI線性化。 電轉(zhuǎn)化步驟：調(diào)但菌落培養(yǎng)過夜，然后轉(zhuǎn)接100ML YPD培養(yǎng)基中，OD600約1.1~1.5時收集細胞，4度離心，冰水洗二次，1M山梨醇洗一次，最后用1ML山梨醇溶，取80UL與5-10ugDNA混溶，轉(zhuǎn)入0.2cm預冷電轉(zhuǎn)杯中，冰浴5min！1.5kv，25μF，200Ω條件下進行電轉(zhuǎn)，立即加1ML 1M山梨醇，然后涂MD板！ 在以上的條件下做了好幾次了都沒有長，求各位高手大俠幫幫忙！指點下。。。萬分感謝！ |
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