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[交流]
【求助/交流】最近我的MTT是這樣做的，結(jié)果很慘 已有4人參與
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之前多次做過MTT，結(jié)果時好時壞 這次實(shí)驗(yàn)是用的耐藥細(xì)胞株做的MTT 測四種藥物對細(xì)胞的IC50 第一種：拓?fù)涮婵担幬锼苄圆皇呛芎�，放置十分鐘可看到沉淀，但搖動后肉眼觀察是均勻的。前面曾經(jīng)做過，藥物的吸光值會對結(jié)果影響很大，出現(xiàn)藥物濃度越高，吸光值越高的情況。 本次實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞鋪板密度5000個每孔，96孔板，24小時后給藥，藥物濃度設(shè)為7個。給藥后24小時，我將含藥培養(yǎng)液全部吸出，并用PBS洗滌一遍，吸掉PBS后，加入MTT，4小 時后加DMSO測吸光值。 490nm時，明顯，還是隨藥物濃度升高OD值升高，藥物濃度很大時（1mg/ml），OD值最高，3點(diǎn)幾，4點(diǎn)幾了。 570nm時，藥物濃度越高OD值越高，但藥物濃度很大時（1mg/ml），相對（0.1mg/ml）的OD值也變化不大，都在2點(diǎn)幾，接近3。 第二種：表阿霉素，細(xì)胞鋪板及處理方式均是一樣的，也用PBS洗了。 在藥物濃度小于（10微克/ml）時，OD值隨藥物濃度增加而減少，有抑制細(xì)胞生長的結(jié)果。但在藥物濃度增大到100微克/ml以上時，吸光值也開始增加了。如果藥物到了1mg/ml。吸光值飚升。 第三種第四種是我們新的藥物，看到的結(jié)果是反而促進(jìn)細(xì)胞增長。這個很難說。怪我當(dāng)時沒有用顯微鏡觀察下，細(xì)胞有沒有死。 很著急的，就是做不出點(diǎn)好結(jié)果，自己也琢磨不出來。 希望各位指點(diǎn)指點(diǎn)，不勝感激。 [ Last edited by 蝸牛VS蝸牛 on 2010-7-24 at 09:45 ] |
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3樓2010-07-24 11:20:59
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蝸牛VS蝸牛(金幣+5): 2010-07-24 11:21:21
1949stone(金幣+3):夠朋友 2010-07-24 13:20:22
蝸牛VS蝸牛(金幣+5): 2010-07-24 11:21:21
1949stone(金幣+3):夠朋友 2010-07-24 13:20:22
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MTT的吸光度一般以不超過1或者1.2為宜，過頭了就是不準(zhǔn)的了。可以試試低一點(diǎn)細(xì)胞密度，如1000個細(xì)胞。另外就是加DMSO的時候加多一點(diǎn)，比如200ul/孔 細(xì)胞數(shù)的控制其實(shí)也要根據(jù)細(xì)胞的個頭來確定的。一般藥物處理24h的話，可以在種板的時候控制給藥當(dāng)天細(xì)胞密度大概在50%左右即可。細(xì)胞太密堆起來的話，做什么實(shí)驗(yàn)都不準(zhǔn)確 如果你的藥物跟MTT之間沒有什么交互作用的話，不要用PBS洗了，因?yàn)?6孔板很容易吸掉細(xì)胞，又引入誤差。 MTT實(shí)驗(yàn)總之就是一個細(xì)致，包括從種細(xì)胞開始，記得將誤差平均分到每個組每個復(fù)孔，比如種組1的第一個，組2的第一個，組3的第一個……組1的第二個……還有就是在種的過程中不斷搖晃要接種的細(xì)胞懸液，保證均勻。96孔種下去的細(xì)胞不要搖，因?yàn)檫@種小孔板一搖細(xì)胞就容易堆在一起不均勻。 另外就是換液的操作槍頭不要戳到板底，最后一步加DMSO前的棄上清也要特別小心，我們是用負(fù)壓很小心來吸的，用槍頭萬一用力過猛就把一片結(jié)晶吸走了 接lz站內(nèi)信，上來回復(fù)~~~~ 還是論壇交流吧 |
2樓2010-07-24 10:06:40
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4樓2010-07-24 11:24:31
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5樓2010-09-17 16:13:04
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