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半杯苦茶金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】固定化酶的底物量如何確定 已有3人參與
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| 現(xiàn)在在做固定化酶，發(fā)現(xiàn)之前的底物量不夠，也可以說(shuō)是濃度不夠，后來(lái)就加大底物濃度，但是酶活還是在上升，現(xiàn)在比較緩慢了。我想請(qǐng)問(wèn)一下，再做固定化酶的時(shí)候，底物量是如何活著根據(jù)什么實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的，是不是加大底物濃度一直到酶活不上升為止呢？ |
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2樓2010-07-27 15:09:44
半杯苦茶
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3樓2010-07-27 23:04:09
4樓2010-07-28 09:20:27
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5樓2010-07-28 09:49:25
6樓2010-07-28 09:54:41
lwiaanngg
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):很熱心~~ 2010-07-29 10:00:38
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這樣說(shuō)吧，有兩個(gè)概念有點(diǎn)混淆，你的底物指的是什么？固定化過(guò)程中酶的用量還是酶反應(yīng)中底物的量 如果是固定化過(guò)程中酶的用量，你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的關(guān)系，一般這個(gè)用量是當(dāng)你的loading capacity基本穩(wěn)定后為止。但也不全是這樣，你還應(yīng)該考慮這時(shí)對(duì)于相同濃度反應(yīng)底物的specific activity，因?yàn)椴皇莑oading越高，activity retention越好，由于surface coverage的影響。 如果指的是酶的底物，這個(gè)比較簡(jiǎn)單了。你只需要做出saturation curve，然后算出Vm&Km，甚至Kcat和Kcat/Km就好，不過(guò)需要比較游離核固定化的結(jié)果的。后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)你saturation curve來(lái)決定。選擇一個(gè)酶活性不錯(cuò)而且不會(huì)太浪費(fèi)底物的濃度就好。 |
7樓2010-07-28 22:30:08
半杯苦茶
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8樓2010-07-29 13:22:58
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9樓2010-07-29 13:48:33
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