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半杯苦茶金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】固定化酶的底物量如何確定 已有3人參與
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| 現(xiàn)在在做固定化酶,發(fā)現(xiàn)之前的底物量不夠,也可以說(shuō)是濃度不夠,后來(lái)就加大底物濃度,但是酶活還是在上升,現(xiàn)在比較緩慢了。我想請(qǐng)問(wèn)一下,再做固定化酶的時(shí)候,底物量是如何活著根據(jù)什么實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的,是不是加大底物濃度一直到酶活不上升為止呢? |
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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這樣說(shuō)吧,有兩個(gè)概念有點(diǎn)混淆,你的底物指的是什么?固定化過(guò)程中酶的用量還是酶反應(yīng)中底物的量 如果是固定化過(guò)程中酶的用量,你需要做不同的酶量和固定化后loading capacity的關(guān)系,一般這個(gè)用量是當(dāng)你的loading capacity基本穩(wěn)定后為止。但也不全是這樣,你還應(yīng)該考慮這時(shí)對(duì)于相同濃度反應(yīng)底物的specific activity,因?yàn)椴皇莑oading越高,activity retention越好,由于surface coverage的影響。 如果指的是酶的底物,這個(gè)比較簡(jiǎn)單了。你只需要做出saturation curve,然后算出Vm&Km,甚至Kcat和Kcat/Km就好,不過(guò)需要比較游離核固定化的結(jié)果的。后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)你saturation curve來(lái)決定。選擇一個(gè)酶活性不錯(cuò)而且不會(huì)太浪費(fèi)底物的濃度就好。 |

金蟲(chóng) (小有名氣)

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