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dengxuepeng金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于固定化酶的問題 已有1人參與
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| 最近在做固定化酶，是用凝血酶酶切大腸桿菌表達(dá)的融合蛋白（帶有凝血酶切點），奇怪的是：電泳時游離酶切的那個泳道沒任何條帶，固定化酶的酶切效果還不錯，這是為什么？請哪位高手指點一下。不勝感激！ |
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鐵桿木蟲 (著名寫手)
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lstt09nk(金幣+3):不錯，歡迎常來生物版~~ 2010-07-29 09:48:46
dengxuepeng(金幣+5):謝謝你的建議 2010-07-30 18:09:04
lstt09nk(金幣+3):不錯，歡迎常來生物版~~ 2010-07-29 09:48:46
dengxuepeng(金幣+5):謝謝你的建議 2010-07-30 18:09:04
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我認(rèn)為你這個結(jié)果有點問題了： 1 游離酶沒有條帶，最大的可能是游離酶不活，或者活性太低。 2 固定化酶有條帶？如果你反應(yīng)是在水相，95%的情況你固定化過的酶會失去一定活性。但你的情況是固定化的酶反而有，這個比較奇怪的。而且你固定化后會產(chǎn)生一些例如steric hindrance&mass transfer resistance的因素，所以但游離酶沒有結(jié)果，你說固定化有結(jié)果，我感到疑惑了...... 有一種可能，游離酶的反應(yīng)條件苛刻而你所用的條件不符合，例如pH值。一般固定化后，酶的耐受性增強(qiáng)，有可能適應(yīng)更寬廣的反應(yīng)條件。不過這只是推測了. 建議你先弄活游離的酶，要不然當(dāng)你投paper時，reviewer一定會concern你的結(jié)果的 |
2樓2010-07-28 22:20:00
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