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abaiwoaini銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】關于葉酸和脂質(zhì)體脂材（氨基-PEG-DSPE）反應連接的幾個問題 已有6人參與
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附件為我copy的截圖，利用“氨基-PEG-DSPE”和“葉酸”反應生成“葉酸-PEG-DSPE”，其中有幾個問題請教： 一、第2步： 1、如果原料的量減為四分之一，DMSO減為1mL，這樣的話吡啶減為0.5mL是否合適？即，根據(jù)吡啶在反應中的作用，如果其他原料試劑均減為四分之一，吡啶是否可以等比例減少來設計實驗？ 2、如果其他原料和試劑的量均不變，只是“氨基-PEG2K-DSPE”的量減為四分之一，吡啶的量還有必要變化嗎？ 3、吡啶如果用三乙胺代替，加入量如何改變？ 二、第5步： 1、為什么要除掉吡啶？可否省去這步？ 2、吡啶的沸點約115度，如何實現(xiàn)這一步？ 三、第6步： 加水的目的是否只是為了除去DCC(DCU)？還有其他目的嗎？可否省去？ 四、第7步： 1、為什么用這么大截留分子量的透析管？產(chǎn)物（MW 3000多）豈不是也漏掉了？ 2、分別用鹽水和水透析的目的是？直接用水透析不行？ 3、普通的透析材料能否耐受DMSO？需要特殊材料的透析管或透析袋？ 五、第10步： 利用FA的吸光系數(shù)，通過測定FA-PEG-DSPE的吸光度來確定含量是否合理？FA-PEG-DSPE的吸光系數(shù)和FA的吸光系數(shù)一致？ 本人非合成專業(yè)人士，望蟲友們不吝賜教！多謝！  |
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abaiwoaini
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截圖中的文字內(nèi)容如下： 1、將葉酸（FA、100mg，0.244 mmol）溶于4mL DMSO。 2、向FA-DMSO溶液中加入氨基-PEG 2K-DSPE（400mg，0.14 mmol)、吡啶(2mL)和二環(huán)己基碳二酰亞胺（130mg，0.63mmol）。 3、室溫反應4h。 4、用TLC監(jiān)測產(chǎn)物的生成和氨基-PEG 2K-DSPE的消失。 5、用旋轉蒸發(fā)儀蒸去吡啶。 6、向溶液中加入50 mL水，離心除去微量不溶物。 7、將離心得到的上清液置于Spectra/Por CE (Spectrum, Houston, TX)管中 (MW cutoff of 300,000 Da)，用鹽水(50 mM, 2×2000 ml) 和 水 (3×2000 ml) 透析。 8、確定透析物只含有產(chǎn)物（TLC顯示一個斑點），將透析物的水溶液凍干。 9、進一步用P2O5真空干燥。 10、利用FA在285nm的吸光系數(shù)為27500 L•mol•cm-1，通過測定連接物甲醇液（0.05mg/mL）的UV吸收來確定FA 的含量。FA 的含量：FA-PEG2000-DSPE 0.29mmol/g（理論值的94％，0.31mmol/g）。 |
2樓2010-08-07 22:19:51
abaiwoaini
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3樓2010-08-09 19:50:56
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4樓2010-08-10 19:02:06
liuxia1107
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6樓2012-05-09 12:30:46
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
7樓2012-09-13 12:08:10
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9樓2015-11-16 20:01:33
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