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coolgongjun木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】請教關(guān)于脂質(zhì)體純化的問題
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| 由于實(shí)驗(yàn)室以前做我這個(gè)方向的很少,我又剛進(jìn)來,所以有個(gè)有點(diǎn)幼稚的問題:文獻(xiàn)上報(bào)道除去脂質(zhì)體內(nèi)未包裹的藥物或者未鑲嵌的修飾物都要用到sephadex或sepharose凝膠柱,這些柱子是用到凝膠滲透色譜中嗎?那樣的話恐怕有點(diǎn)難度因?yàn)槟z滲透色譜很貴,實(shí)驗(yàn)室不可能買,學(xué)校的也不可能讓我們換柱子吧。能夠直接像柱色譜那樣用嗎？（我看的文獻(xiàn)有些明確指出需要凝膠滲透色譜，也有的語焉不詳只是說要通過凝膠柱來提純。）謝謝！ |
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5樓2010-08-22 09:09:49
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karl2100(金幣+1):謝謝回復(fù)！ 2010-08-30 00:57:05
coolgongjun(金幣+5):謝謝! 2010-08-31 08:05:04
karl2100(金幣+1):謝謝回復(fù)！ 2010-08-30 00:57:05
coolgongjun(金幣+5):謝謝! 2010-08-31 08:05:04
| 我本科實(shí)驗(yàn)時(shí)做過，但具體的不是記得很清楚，我大概說一下，向兩個(gè)1ml一次性注射針筒中加入相同多的G50，加樣時(shí)盡量均勻不要留氣泡，用離心機(jī)平衡好，向其中一根中加入你的脂質(zhì)體樣，比方說0.1ml，那另一根也加入0.1ml空白液，放離心機(jī)中離心，好像就能分離了，脂質(zhì)體就會(huì)下來，未包裹的藥品就留在柱子上 |
9樓2010-08-29 12:59:35
dingwjs
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coolgongjun(金幣+10):謝謝!辛苦了! 2010-09-02 08:06:02
qinhy(金幣+1):多謝指教，歡迎常來藥學(xué)版！ 2010-12-29 17:18:00
coolgongjun(金幣+10):謝謝!辛苦了! 2010-09-02 08:06:02
qinhy(金幣+1):多謝指教，歡迎常來藥學(xué)版！ 2010-12-29 17:18:00
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我做的是微量的，用離心機(jī)2000r/min轉(zhuǎn)3分鐘，脂質(zhì)體就下來了，大點(diǎn)兒的柱子我不清楚，我沒做過，不好意思 找了下以前的實(shí)驗(yàn)記錄，你參考一下吧 凝膠微型柱的制備 原理：由于凝膠中有許多小孔，體積較大的脂質(zhì)體不進(jìn)入小孔而從間隙中先流出，而體積較小的未包裹的藥物及雜質(zhì)進(jìn)入小孔后流出而達(dá)到分離的目的。 制備：取Sephagex G-50適量，填入1ml塑料注射器中，此注射器事先取芯后塞入一小塊棉花。將注射器放入離心機(jī)中，再2000r/min離心3min，除去過量的生理鹽水，柱床高度達(dá)0.8ml刻度線位置。 飽和微型柱 原理：由于凝膠表面上的許多位點(diǎn)能與脂質(zhì)體膜相互作用結(jié)合，照成小量的脂質(zhì)體丟失。因此用空白脂質(zhì)體預(yù)先飽和柱的表面，避免由于吸附照成的脂質(zhì)體丟失現(xiàn)象的發(fā)生。 操作：分取空白脂質(zhì)體0.1ml，加到微型柱上，在2000r/min離心3min，再加入0.2ml的緩沖液洗滌微型柱。 分離純化脂質(zhì)體 將脂質(zhì)體各取0.1ml置微型柱離心分離，收集第一管，理論上極為純化的脂質(zhì)體。 |
11樓2010-09-01 16:08:42
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2樓2010-08-21 19:16:04
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3樓2010-08-22 07:53:35
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4樓2010-08-22 08:15:52
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10樓2010-08-31 10:34:07
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