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pidou213木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】GS115在MGY液體培養(yǎng)基內(nèi)不生長(zhǎng) 已有2人參與
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請(qǐng)問(wèn)大家，謝謝... [ Last edited by pidou213 on 2010-8-10 at 16:41 ] |
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susizheng
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2樓2010-08-09 19:57:47
susizheng
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3樓2010-08-10 20:20:44
pidou213
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4樓2010-08-11 21:45:30
susizheng
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-08-12 05:45:15
pidou213(金幣+2):期待你再次恢復(fù) 2010-08-13 23:42:16
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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pidou213(金幣+2):期待你再次恢復(fù) 2010-08-13 23:42:16
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有意義啊，不同的蛋白有的Mut+表達(dá)量高，有的Muts表達(dá)量高。所以一般同時(shí)篩出這兩種表型都表達(dá)看看。 另外，胞內(nèi)表達(dá)適合用Muts表型表達(dá)，分泌表達(dá)適合用Mut+表型表達(dá)。 PS：親愛(ài)的pidou213同志，鑒于你提到很多比赤酵母表達(dá)的問(wèn)題，都可以在操作手冊(cè)里面有詳細(xì)的解答，而且我也在你這賺了太多金幣了，  所以推薦你下載下手冊(cè)詳細(xì)學(xué)習(xí)下，這樣會(huì)少走很多彎路。下載方法很簡(jiǎn)單，直接百度or google：畢赤酵母表達(dá)手冊(cè)。 |
5樓2010-08-11 22:20:12
pidou213
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呵呵 沒(méi)關(guān)系，你能幫助我，花點(diǎn)金幣是沒(méi)關(guān)系的，酵母表達(dá)手冊(cè)我倒是看過(guò)了，但是完全按照那個(gè)進(jìn)行操作的話會(huì)非常麻煩。 譬如關(guān)于Muts和Mut+表型的問(wèn)題，最后手冊(cè)的意思是兩個(gè)表型都嘗試一下比較好，然后我就覺(jué)得既然都要嘗試，干嗎還要區(qū)分呢？ 還有用載體PIC9K的時(shí)候，為什么電轉(zhuǎn)完以后現(xiàn)在MD培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后再進(jìn)行G418濃度篩選呢/直接進(jìn)行YPD+G418濃度篩選不行嗎？ |
6樓2010-08-13 23:41:36
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reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-08-14 07:43:04
pidou213(金幣+3):謝謝 2010-08-15 23:07:20
reasonspare(金幣+2):謝謝分享。 2010-08-14 07:43:04
pidou213(金幣+3):謝謝 2010-08-15 23:07:20
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之所以要區(qū)分，我上面也說(shuō)了，一般胞內(nèi)表達(dá)適合用Muts表型表達(dá)，分泌表達(dá)適合用Mut+表型表達(dá)。為了這個(gè)。 另外，之所以先用MD培養(yǎng)基篩選，是因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)缺陷型篩選很準(zhǔn)確，長(zhǎng)出來(lái)的都是轉(zhuǎn)化子，但是一般情況下認(rèn)為高拷貝表達(dá)量較高，如果你的表達(dá)量不高，就可以嘗試用高濃度的G418篩多拷貝了。 |
7樓2010-08-14 00:30:29
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