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pidou213

木蟲 (正式寫手)

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[求助] PICZaA在GS115內(nèi)表達(dá)跨膜蛋白

1，PICZaA在GS115內(nèi)的分泌表達(dá)后，上清主要有什么蛋白？一般在多大KD的？
2，PICZaA在GS115內(nèi)表達(dá)跨膜蛋白的時(shí)候，跨膜蛋白的跨膜區(qū)需要處理掉嗎？

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1樓 2011-04-28 17:16:07

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susizheng

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【答案】應(yīng)助回帖

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1949stone(金幣+3): 高手高高手 2011-04-28 19:00:40
pidou213(金幣+1): 還是應(yīng)該感謝一下 2011-04-29 08:37:10
pidou213(金幣+1): 講的有道理 2011-05-10 12:31:38
pidou213(金幣+1): 再加一個(gè) 2011-07-01 12:30:35
pidou213(金幣+2): xx 2011-07-17 16:24:06

1.這個(gè)應(yīng)該需要通過(guò)跑PAGE來(lái)確定。
2.最好除掉，因?yàn)榉置谟玫氖荘ICZaA上的a factor。不切掉跨膜區(qū)，表達(dá)時(shí)，酵母不一定能夠正確的去剪切。
如果我做，估計(jì)得切跨膜區(qū)做一個(gè)，不切做一個(gè)。做個(gè)對(duì)照，因?yàn)樽罱K酶活最能說(shuō)明問題。

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2樓2011-04-28 17:54:51

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Originally posted by susizheng at 2011-04-28 17:54:51:
1.這個(gè)應(yīng)該需要通過(guò)跑PAGE來(lái)確定。
2.最好除掉，因?yàn)榉置谟玫氖荘ICZaA上的a factor。不切掉跨膜區(qū)，表達(dá)時(shí)，酵母不一定能夠正確的去剪切。
如果我做，估計(jì)得切跨膜區(qū)做一個(gè)，不切做一個(gè)。做個(gè)對(duì)照，因?yàn)樽罱K酶活 ...

首先感謝你的回復(fù)，但是我想說(shuō)的是，我之所以求助，就是因?yàn)槲也淮_定，所以想找人來(lái)指導(dǎo)一下，結(jié)果你說(shuō)了半天都是拿不定的答案，并且你也知道，做這個(gè)酵母表達(dá)很麻煩的，如果我自己有時(shí)間試一試的話，我還來(lái)求助做什么呢

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3樓2011-04-29 08:36:24

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1.這個(gè)應(yīng)該需要通過(guò)跑PAGE來(lái)確定

這個(gè)問題，我的意思是想問問做過(guò)的人，拿張圖或者根據(jù)自己的所知來(lái)回答，結(jié)果你說(shuō)用PAGE膠來(lái)確定，你實(shí)在是太實(shí)在了，我相信做蛋白的就知道用PAGE來(lái)確定蛋白的吧？@

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4樓2011-04-29 08:38:56

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Originally posted by pidou213 at 2011-04-29 08:36:24:
首先感謝你的回復(fù)，但是我想說(shuō)的是，我之所以求助，就是因?yàn)槲也淮_定，所以想找人來(lái)指導(dǎo)一下，結(jié)果你說(shuō)了半天都是拿不定的答案，并且你也知道，做這個(gè)酵母表達(dá)很麻煩的，如果我自己有時(shí)間試一試的話，我還來(lái)求 ...

酵母表達(dá)很煩嗎？我從質(zhì)粒構(gòu)建到整合到表達(dá)到純化，一共化了兩個(gè)星期。
不是我讓你試，是你的蛋白要想做出最優(yōu)的表達(dá)，是不得不試，你看些綜述就知道了。
做實(shí)驗(yàn)本來(lái)就是紙上得來(lái)終覺淺，絕知此事要躬行的。

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5樓2011-04-30 11:09:26

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Originally posted by susizheng at 2011-04-30 11:09:26:
酵母表達(dá)很煩嗎？我從質(zhì)粒構(gòu)建到整合到表達(dá)到純化，一共化了兩個(gè)星期。
不是我讓你試，是你的蛋白要想做出最優(yōu)的表達(dá)，是不得不試，你看些綜述就知道了。
做實(shí)驗(yàn)本來(lái)就是紙上得來(lái)終覺淺，絕知此事要躬行的。

我從質(zhì)粒構(gòu)建到整合到表達(dá)到純化，一共化了兩個(gè)星期。

我真的很佩服你對(duì)不起，碰上高手了

但是據(jù)我所知，載體構(gòu)建后需要測(cè)序驗(yàn)證，然后轉(zhuǎn)化后酵母需要培養(yǎng)2-3天才能長(zhǎng)出。然后你還要再次確定是否轉(zhuǎn)化進(jìn)去了（——也就是說(shuō)是否是假陽(yáng)性），然后誘導(dǎo)表達(dá) 需要至少鑒定四天的再然后做Western 至少一天才能出結(jié)果把？

兩個(gè)星期我實(shí)在佩服

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6樓2011-04-30 18:32:09

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Originally posted by pidou213 at 2011-04-30 18:32:09:
我從質(zhì)粒構(gòu)建到整合到表達(dá)到純化，一共化了兩個(gè)星期。

我真的很佩服你對(duì)不起，碰上高手了

但是據(jù)我所知，載體構(gòu)建后需要測(cè)序驗(yàn)證，然后轉(zhuǎn)化后酵母需要培養(yǎng)2-3天才能長(zhǎng)出。然后你還要再次確定是否轉(zhuǎn)化 ...

做的順手的話，中間不出什么問題
e.coli大約也就只要一周時(shí)間左右唄，酵母費(fèi)勁點(diǎn)，長(zhǎng)的慢些，但也要不了太久。

當(dāng)然中間不出問題，不需要優(yōu)化…要是有問題了，那可能兩年也做不出來(lái)

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7樓2011-04-30 23:22:09

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Originally posted by roomofxw at 2011-04-30 23:22:09:
做的順手的話，中間不出什么問題
e.coli大約也就只要一周時(shí)間左右唄，酵母費(fèi)勁點(diǎn)，長(zhǎng)的慢些，但也要不了太久。

當(dāng)然中間不出問題，不需要優(yōu)化…要是有問題了，那可能兩年也做不出來(lái)

好吧總的來(lái)說(shuō) 還是感謝你的答復(fù) 真希望在現(xiàn)實(shí)中有這么一個(gè)諍友，或許實(shí)驗(yàn)就會(huì)快很多，進(jìn)步會(huì)快很多，哈哈你在哪個(gè)城市？

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8樓2011-05-01 09:12:40

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Originally posted by pidou213 at 2011-05-01 09:12:40:
好吧總的來(lái)說(shuō) 還是感謝你的答復(fù) 真希望在現(xiàn)實(shí)中有這么一個(gè)諍友，或許實(shí)驗(yàn)就會(huì)快很多，進(jìn)步會(huì)快很多，哈哈你在哪個(gè)城市？

北京

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9樓2011-05-02 21:06:42

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Originally posted by roomofxw at 2011-05-02 21:06:42:
北京

不會(huì)是中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)的吧？

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10樓2011-05-02 22:42:01

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