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[交流]
【求助/交流】仍然是關(guān)于引物的一個問題！！！ 已有2人參與
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欲克隆棉花中的一個基因，在NCBI上已經(jīng)搜索到這個基因mRNA的全長，目的是要編碼區(qū)，以后可能轉(zhuǎn)基因藥用，請問該怎樣設(shè)計引物？ 有同學(xué)說直接從起始密碼子開始設(shè)計，也有人說從起始密碼子前的一段序列中設(shè)計。我也想從起始密碼子開始設(shè)計，于是選用編碼區(qū)前21個堿基作為引物，但是用軟件分析后發(fā)現(xiàn)這個引物不太合適，存在錯配，頸環(huán)等現(xiàn)象，利用引物設(shè)計軟件設(shè)計發(fā)現(xiàn)在起始密碼子附近沒有合適的引物，請問我該怎么辦？ |
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2樓2010-08-10 11:33:40
ben1147
木蟲 (正式寫手)
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amisking(金幣+2):good！ 2010-08-10 12:52:27
lmzxcom1:其實(shí)更多時候還是要認(rèn)為去設(shè)計和驗(yàn)證的，不要依賴軟件，它只是輔助 2010-08-10 13:06:40
hnndpt(金幣+1): 2010-08-10 15:12:29
amisking(金幣+2):good！ 2010-08-10 12:52:27
lmzxcom1:其實(shí)更多時候還是要認(rèn)為去設(shè)計和驗(yàn)證的，不要依賴軟件，它只是輔助 2010-08-10 13:06:40
hnndpt(金幣+1): 2010-08-10 15:12:29
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5'UTR長度是有限的，要想擴(kuò)全長只能在這里設(shè)計了 軟件只是個理論情況，選幾個還看得過去的引物，實(shí)際P一下看看，調(diào)整一下條件，用用Touchdown，加點(diǎn)DMSO之類的，沒準(zhǔn)能P出來呢 一旦有了條帶趕緊克隆到質(zhì)粒上，測序正確的話以后就直接從質(zhì)粒上切或者P |
3樓2010-08-10 12:15:02
shenfei-
銅蟲 (小有名氣)
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4樓2010-08-10 15:29:57
mgangle
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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5樓2010-08-10 15:57:23
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