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[交流]
【求助/交流】pcr p不出特異性條帶 已有12人參與
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我最近做的pcr 目的片段是1194，做了三次pcr 分別用59 61 63度的退火溫度，在62度是能p出來條帶，但是非特異性條帶很多，提高到63度是出現(xiàn)一條大約在800bp的條帶 ，不知道是怎么回事 模板 1 引物 1 1 酶 0.5 水 23 buffer 3 dNTP 1 這是體現(xiàn)，請教大家了 |
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2樓2010-08-25 11:49:29
張煥春
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3樓2010-08-25 12:14:24
怎么都行
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lstt09nk(金幣+3):很全面，很活躍~ 2010-08-25 12:37:42
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對于你說的情況，62度能擴增而63度只擴出一條非目的帶，我猜你可以用touch down PCR試試，退火溫度由65度降落到60度， 每循環(huán)降落0.5度，10個循環(huán)，后20個循環(huán)用60度退火。 還有，你的引物設(shè)計出來后有沒有BLAST比對過，說不定該對引物能跟該物種基因組的其他位置更易結(jié)合引發(fā)。 還有一個可能，你設(shè)計的這段引物在該物種基因組的變異熱點區(qū)域，存在序列deletion等變異方式，你用作引物設(shè)計的模板序列在該區(qū)域長度是1194，但你做的那個生物株系或許就只有800bp左右也說不定。 |
4樓2010-08-25 12:31:26
crydevil
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8樓2010-08-25 20:33:22
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9樓2010-08-25 21:11:19
10樓2010-08-27 16:14:06
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