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Lee_Py銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
想問(wèn)下在以cDNA為模板時(shí)，PCR的結(jié)果卻是徒步 什么原因
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| 用內(nèi)標(biāo)P的結(jié)果就很好 說(shuō)明不是CDNA的問(wèn)題 但是為啥用自己的引物卻P那么差 P的根marker一樣 |
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yabxxh
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2樓2011-06-02 15:29:51
Lee_Py
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3樓2011-06-02 17:07:38
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4樓2011-06-02 17:16:11
adslye
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-02 20:42:33
Lee_Py(金幣+2): 2011-06-04 15:49:38
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Lee_Py(金幣+2): 2011-06-04 15:49:38
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引物特異性不好吧。 我以前P側(cè)翼序列時(shí)。經(jīng)常P出彌散帶，就是真實(shí)PCR的反映。結(jié)果優(yōu)化后能P出單一條帶也是單引物自擴(kuò)結(jié)果。 如果你一定要優(yōu)化條件，可以用TOUCH DOWN。 就是退火逐步降低。我的經(jīng)驗(yàn)是能篩到單一條帶。但不保證是你要的目的條帶。 |
5樓2011-06-02 17:17:02
churchill87426
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-02 20:42:43
Lee_Py(金幣+3): 2011-06-04 15:49:46
amisking(金幣+3): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-06-02 20:42:43
Lee_Py(金幣+3): 2011-06-04 15:49:46
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LZ 的目的條帶多長(zhǎng)啊？其實(shí)內(nèi)標(biāo)很好并不能說(shuō)明cDNA好啊，我這段時(shí)間做的用國(guó)產(chǎn)試劑盒反轉(zhuǎn)錄就能出actin但是目的條帶不出（目的條帶2100bp）,后來(lái)?yè)Q個(gè)進(jìn)口反轉(zhuǎn)錄試劑盒，一次目的條帶就出了，當(dāng)然actin也出。 不知道LZ最后P出來(lái)目的條帶沒(méi)��？ 另外引物特異性問(wèn)題，LZ可以用NCBI上blast一下，看看非特異性擴(kuò)增多不多，如果不行就試一下改改引物。 |
6樓2011-06-02 18:40:16
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