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dudu1161銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】蛋白純化后透析及濃縮問題
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蟲友們，大家好！請教大家一個問題，不勝感激。 蛋白純化時洗脫緩沖液為300 mM NaCl; 350 mM imidazole,50 mM sodium phosphate buffer, pH 8.0。因為后續(xù)實驗要腸激酶切割，所以用腸激酶緩沖液來透析，但是透析過夜后沉淀。原因可能是透析緩沖液的pH值（7.4）與目的蛋白等電點(7.2)相差太近。 然后用Amicon超濾離心管來除鹽、濃縮，效果不好，可能也有操作不熟練問題，基本沒有濃縮效果。 所以還是想通過透析，凍干的方法來達到除鹽、濃縮的目的，但是用腸激酶緩沖液的話又會沉淀，而且凍干后對溶液也有一個濃縮的效果。 現(xiàn)在我有兩種想法： 一、將腸激酶緩沖液的pH值調(diào)到8.5，透析過夜，問題是凍干后會將蛋白所在緩沖液一起凍干濃縮； 二、將超純水的pH值調(diào)到8.5，透析過夜。 不知蟲友們有沒有更好的解決方法，請蟲友們不吝賜教，多謝大家！ |
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