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dudu1161銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】蛋白純化后透析及濃縮問(wèn)題
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蟲(chóng)友們，大家好！請(qǐng)教大家一個(gè)問(wèn)題，不勝感激。 蛋白純化時(shí)洗脫緩沖液為300 mM NaCl; 350 mM imidazole,50 mM sodium phosphate buffer, pH 8.0。因?yàn)楹罄m(xù)實(shí)驗(yàn)要腸激酶切割，所以用腸激酶緩沖液來(lái)透析，但是透析過(guò)夜后沉淀。原因可能是透析緩沖液的pH值（7.4）與目的蛋白等電點(diǎn)(7.2)相差太近。 然后用Amicon超濾離心管來(lái)除鹽、濃縮，效果不好，可能也有操作不熟練問(wèn)題，基本沒(méi)有濃縮效果。 所以還是想通過(guò)透析，凍干的方法來(lái)達(dá)到除鹽、濃縮的目的，但是用腸激酶緩沖液的話(huà)又會(huì)沉淀，而且凍干后對(duì)溶液也有一個(gè)濃縮的效果。 現(xiàn)在我有兩種想法： 一、將腸激酶緩沖液的pH值調(diào)到8.5，透析過(guò)夜，問(wèn)題是凍干后會(huì)將蛋白所在緩沖液一起凍干濃縮； 二、將超純水的pH值調(diào)到8.5，透析過(guò)夜。 不知蟲(chóng)友們有沒(méi)有更好的解決方法，請(qǐng)蟲(chóng)友們不吝賜教，多謝大家！ |
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7樓2011-12-13 17:08:35
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3樓2010-08-29 11:43:47
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4樓2010-08-29 14:34:00
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