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peximin金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】加裂解液后離心到底需不需要冷凍離心?困惑。。。
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記得前一段時間和大家交流過這個問題,我在超聲破碎大腸桿菌,加裂解液后離心,此時需不需要冷凍離心,大家意見很一致,為了防止蛋白降解,最好低溫離心?墒俏椰F(xiàn)在在一篇文獻(中文)中看到這樣的一段話: 在加入蛋白裂解液之前,通常需要通過低溫及添加蛋 白酶抑制劑來減少蛋白的降解,因此樣品一般宜保持在4℃左 右的低溫,此時操作常選擇在冰浴中進行,離心時設(shè)溫4℃。 在加入蛋白裂解液之后,由于裂解液的主要成分尿素在低溫下 會因溶解度的下降而析出,導(dǎo)致裂解液成分改變,影響蛋白樣 品的溶解。故加入裂解液后樣品置室溫溶解即可。此外,還應(yīng) 避免樣品溫度過高。尿素在高于37℃時易造成蛋白的氨甲酰 化修飾。因此加入裂解液后樣品室溫放置,需要離心時設(shè)定溫 度以15~20℃為宜。樣品制備完成后再將其分裝凍存于一8O ℃。 現(xiàn)在我很困惑,到底哪種說法才是最好的呢? |
新蟲 (小有名氣)


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[論文投稿]
申請回稿延期一個月,編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變,給編輯又寫郵件了,沒回復(fù)
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