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peximin金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】加裂解液后離心到底需不需要冷凍離心？困惑。。。
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記得前一段時(shí)間和大家交流過這個(gè)問題，我在超聲破碎大腸桿菌，加裂解液后離心，此時(shí)需不需要冷凍離心，大家意見很一致，為了防止蛋白降解，最好低溫離心。可是我現(xiàn)在在一篇文獻(xiàn)（中文）中看到這樣的一段話： 在加入蛋白裂解液之前，通常需要通過低溫及添加蛋 白酶抑制劑來減少蛋白的降解，因此樣品一般宜保持在4℃左 右的低溫，此時(shí)操作常選擇在冰浴中進(jìn)行，離心時(shí)設(shè)溫4℃。 在加入蛋白裂解液之后，由于裂解液的主要成分尿素在低溫下 會(huì)因溶解度的下降而析出，導(dǎo)致裂解液成分改變，影響蛋白樣 品的溶解。故加入裂解液后樣品置室溫溶解即可。此外，還應(yīng) 避免樣品溫度過高。尿素在高于37℃時(shí)易造成蛋白的氨甲酰 化修飾。因此加入裂解液后樣品室溫放置，需要離心時(shí)設(shè)定溫 度以15~20℃為宜。樣品制備完成后再將其分裝凍存于一8O ℃。 現(xiàn)在我很困惑，到底哪種說法才是最好的呢？ |
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