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mqw1983銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】正葡萄糖鉗夾技術 操作步驟
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| 正葡萄糖鉗夾技術 操作步驟請問誰有詳細點的？最好是做動物的。急用，非常感謝！ |
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- 性別: GG
- 專業(yè): 民族藥學
mqw1983(金幣+10): 2010-09-17 17:33:03
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3個月前，我剛好做過正糖鉗實驗。我的具體步驟無私的奉獻給你，有什么問題可以問。 【實驗儀器、試劑及器械】 WZ-50C2單道微量注射泵，OneTouchRUltra血糖儀、試紙，胰島素注射液，肝素鈉注射液，葡萄糖注射液。 手術器械：小動脈夾、靜脈輸液針、顯微外科剪、顯微外科鑷、插管、一次性使用無菌注射器、40W手術燈、大鼠固定板、止血鉗等。 【實驗方法】 手術方法： 大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（25mg/kg）麻醉，仰位固定，切開頸部正中皮膚。分離右側頸外靜脈，結扎遠心端，用眼科剪作切口，向近心端插入連接三通旋塞的插管（插管中預先注入80ul/ml肝素生理鹽水溶液）。用眼科鑷夾住靜脈壁和插管，向前行進0.5cm，結扎固定插管。分離左側頸總動脈，結扎遠心端，用小動脈夾夾住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入連接1ml針筒的插管（插管中預先注入50u/ml肝素生理鹽水溶液）。放開小動脈夾，用眼科鑷夾住動脈壁和插管，向前行進0.5cm，結扎固定插管。頸靜脈注射50ul/ml肝素0.1ml/100g作預防抗凝。三通旋塞的一個進口連接胰島素輸注微量泵另一個進口連接20%葡萄糖輸注微量泵，避免管腔中出現(xiàn)氣泡。待插管手術和輸注裝置安裝完畢后，開始實驗。 實驗方法： ⑴用1ml針筒從右頸動脈取血0.5ml，用手術鉗夾住插管，用OneTouchR Ultra血糖儀和試紙測定基礎血糖約需5ul，放開手術鉗，將剩余血再注回頸總動脈，插管頭上加50ul肝素生理鹽水溶液。 ⑵胰島素以速率為0.6ml/h（10µl/min）恒速輸注，胰島素輸注10min后，以⑴同樣方法取右頸動脈血測血糖值，如血糖低于基礎值，則開始輸注20%葡萄糖，每隔10min取血，測定血糖。根據(jù)血糖值不斷調整葡萄糖輸注速率，使血糖維持在5mmol/L上下，一般30~60min可達穩(wěn)態(tài)。達穩(wěn)態(tài)后，每5min取血測血糖，記錄穩(wěn)態(tài)下6-8次葡萄糖輸注速率的平均值作為GIR（glucose infusion rate）取穩(wěn)態(tài)下6次血糖的平均值作為穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）。當大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗時，血糖持續(xù)升高，要求葡萄糖的流量更低，將20%葡萄糖溶液改為10%葡萄糖溶液。若血糖繼續(xù)升高，則再更換為5%葡萄糖溶液。觀察大鼠穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）和葡萄糖輸注速率（GIR）。 【觀察指標】 大鼠正糖鉗試驗穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）和葡萄糖輸注速率（GIR）。 【注意事項】 1.手術過程中，操作應輕盡量避免不必要的損傷，頸部切口也不宜太大，以防體液損失過多。 2.分離皮膚與其周圍組織時，要細心，盡量避免出血。 3.正糖鉗實驗在短時間內連續(xù)多次測定血糖，故要求快速測血糖的方法，可采用血糖儀及其配套試紙來完成測定。 4.葡萄糖輸入體內直接引起血糖變化，而輸入胰島素需經(jīng)體內反應后再引起血糖變化，故血糖對葡萄糖輸注速率較對胰島素輸注速率更敏感，當血糖被“鉗”�。囱翘幱诜�(wěn)態(tài)）時，葡萄糖輸注速率隨胰島素輸注速率提高而提高。 5.實驗過程中要盡量保持安靜，以防實驗動物應激而影響實驗數(shù)據(jù)。 |
2樓2010-09-15 20:30:44
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