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mqw1983銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】正葡萄糖鉗夾技術(shù) 操作步驟
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| 正葡萄糖鉗夾技術(shù) 操作步驟請(qǐng)問(wèn)誰(shuí)有詳細(xì)點(diǎn)的？最好是做動(dòng)物的。急用，非常感謝！ |
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鐵桿木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 民族藥學(xué)
mqw1983(金幣+10): 2010-09-17 17:33:03
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3個(gè)月前，我剛好做過(guò)正糖鉗實(shí)驗(yàn)。我的具體步驟無(wú)私的奉獻(xiàn)給你，有什么問(wèn)題可以問(wèn)。 【實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及器械】 WZ-50C2單道微量注射泵，OneTouchRUltra血糖儀、試紙，胰島素注射液，肝素鈉注射液，葡萄糖注射液。 手術(shù)器械：小動(dòng)脈夾、靜脈輸液針、顯微外科剪、顯微外科鑷、插管、一次性使用無(wú)菌注射器、40W手術(shù)燈、大鼠固定板、止血鉗等。 【實(shí)驗(yàn)方法】 手術(shù)方法： 大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（25mg/kg）麻醉，仰位固定，切開頸部正中皮膚。分離右側(cè)頸外靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，用眼科剪作切口，向近心端插入連接三通旋塞的插管（插管中預(yù)先注入80ul/ml肝素生理鹽水溶液）。用眼科鑷夾住靜脈壁和插管，向前行進(jìn)0.5cm，結(jié)扎固定插管。分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，用小動(dòng)脈夾夾住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入連接1ml針筒的插管（插管中預(yù)先注入50u/ml肝素生理鹽水溶液）。放開小動(dòng)脈夾，用眼科鑷夾住動(dòng)脈壁和插管，向前行進(jìn)0.5cm，結(jié)扎固定插管。頸靜脈注射50ul/ml肝素0.1ml/100g作預(yù)防抗凝。三通旋塞的一個(gè)進(jìn)口連接胰島素輸注微量泵另一個(gè)進(jìn)口連接20%葡萄糖輸注微量泵，避免管腔中出現(xiàn)氣泡。待插管手術(shù)和輸注裝置安裝完畢后，開始實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)方法： ⑴用1ml針筒從右頸動(dòng)脈取血0.5ml，用手術(shù)鉗夾住插管，用OneTouchR Ultra血糖儀和試紙測(cè)定基礎(chǔ)血糖約需5ul，放開手術(shù)鉗，將剩余血再注回頸總動(dòng)脈，插管頭上加50ul肝素生理鹽水溶液。 ⑵胰島素以速率為0.6ml/h（10µl/min）恒速輸注，胰島素輸注10min后，以⑴同樣方法取右頸動(dòng)脈血測(cè)血糖值，如血糖低于基礎(chǔ)值，則開始輸注20%葡萄糖，每隔10min取血，測(cè)定血糖。根據(jù)血糖值不斷調(diào)整葡萄糖輸注速率，使血糖維持在5mmol/L上下，一般30~60min可達(dá)穩(wěn)態(tài)。達(dá)穩(wěn)態(tài)后，每5min取血測(cè)血糖，記錄穩(wěn)態(tài)下6-8次葡萄糖輸注速率的平均值作為GIR（glucose infusion rate）取穩(wěn)態(tài)下6次血糖的平均值作為穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）。當(dāng)大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗時(shí)，血糖持續(xù)升高，要求葡萄糖的流量更低，將20%葡萄糖溶液改為10%葡萄糖溶液。若血糖繼續(xù)升高，則再更換為5%葡萄糖溶液。觀察大鼠穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）和葡萄糖輸注速率（GIR）。 【觀察指標(biāo)】 大鼠正糖鉗試驗(yàn)穩(wěn)態(tài)下的血糖（BG）和葡萄糖輸注速率（GIR）。 【注意事項(xiàng)】 1.手術(shù)過(guò)程中，操作應(yīng)輕盡量避免不必要的損傷，頸部切口也不宜太大，以防體液損失過(guò)多。 2.分離皮膚與其周圍組織時(shí)，要細(xì)心，盡量避免出血。 3.正糖鉗實(shí)驗(yàn)在短時(shí)間內(nèi)連續(xù)多次測(cè)定血糖，故要求快速測(cè)血糖的方法，可采用血糖儀及其配套試紙來(lái)完成測(cè)定。 4.葡萄糖輸入體內(nèi)直接引起血糖變化，而輸入胰島素需經(jīng)體內(nèi)反應(yīng)后再引起血糖變化，故血糖對(duì)葡萄糖輸注速率較對(duì)胰島素輸注速率更敏感，當(dāng)血糖被“鉗”住（即血糖處于穩(wěn)態(tài)）時(shí)，葡萄糖輸注速率隨胰島素輸注速率提高而提高。 5.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要盡量保持安靜，以防實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)激而影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 |
2樓2010-09-15 20:30:44
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