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mzlfengye銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】求助細(xì)胞支架材料的滅菌及細(xì)胞向支架材料上的接種方法
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| 求助求助！細(xì)胞支架材料大家都用什么方法滅菌�。烤唧w步驟是什么？還有就是細(xì)胞往支架材料上接種是怎么進(jìn)行的？一般多長時(shí)間就可以看到細(xì)胞有沒有接種上去��？我采用75%酒精滅菌，接種后培養(yǎng)36h后發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)液變黃、混濁，用倒置顯微鏡也看不到支架上有沒有細(xì)胞��？不過感覺好像沒有哦！這到底是怎么回事��？是污染了嗎？怎么支架上會(huì)沒有一點(diǎn)點(diǎn)細(xì)胞呢，我接種量挺大的。而且，換液后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中有許多小沫沫，好像是支架被分解的，具體我也搞不清楚。另外，我用的是蛋白支架，這種支架Biomaterials上好多文獻(xiàn)都有報(bào)道的。但我的怎么會(huì)出現(xiàn)這樣的情況，著急啊！請各位大俠幫幫忙！ |
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kaobochiren
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2樓2010-09-07 14:38:01
wwgfz
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mzlfengye(金幣+1):謝謝你，不過我的支架制備過程應(yīng)該還好，主要是不清楚75%酒精泡30min后紫外2h能達(dá)到無菌嗎？ 2010-09-09 18:28:37
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:53
mzlfengye(金幣+1):謝謝你，不過我的支架制備過程應(yīng)該還好，主要是不清楚75%酒精泡30min后紫外2h能達(dá)到無菌嗎？ 2010-09-09 18:28:37
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:53
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你的結(jié)果上看，肯定是染菌了。 呵呵，你要更具體點(diǎn)，什么蛋白支架。你的蛋白支架可以泡酒精而不變形？可以采用環(huán)氧乙烷嗎？文獻(xiàn)中如果都是采用酒精滅菌的話，你可以嘗試在制備支架的時(shí)候，把蛋白溶液過濾，把交聯(lián)劑也過濾，然后可能會(huì)好一點(diǎn)。 |
3樓2010-09-09 11:54:53
aegeansyang
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mzlfengye(金幣+1):謝謝你��！ 2010-09-10 13:49:45
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:47
mzlfengye(金幣+1):謝謝你��！ 2010-09-10 13:49:45
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:47
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首先肯定是污染了，如果肉眼看到渾濁的話，顯微鏡下應(yīng)該看到蠕動(dòng)的菌；細(xì)胞估計(jì)是全部死亡了，細(xì)菌感染后，細(xì)胞完全被裂解了。所以你看不到細(xì)胞。 滅菌的話，紫外照射加乙醇浸泡 如果要觀察細(xì)胞的話，一般接種1-2小時(shí)后觀察一下，細(xì)胞應(yīng)該貼附了。但是，由于你用的是支架材料，表面不平的話，一般顯微鏡也難以觀察到細(xì)胞�？梢宰鰝�(gè)簡單的熒光染色，在熒光顯微鏡下觀察。 |
4樓2010-09-10 09:28:01
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mzlfengye(金幣+1):我正在試著改進(jìn)滅菌條件，實(shí)在不行就得去四醫(yī)大照Co60…… 2010-09-10 13:50:42
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:39
mzlfengye(金幣+1):我正在試著改進(jìn)滅菌條件，實(shí)在不行就得去四醫(yī)大照Co60…… 2010-09-10 13:50:42
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論 2010-09-20 22:10:39
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5樓2010-09-10 09:37:18
6樓2010-09-11 09:12:54
dongchao
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7樓2010-09-13 09:42:32
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