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mzlfengye銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】求助細(xì)胞支架材料的滅菌及細(xì)胞向支架材料上的接種方法
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| 求助求助!細(xì)胞支架材料大家都用什么方法滅菌?具體步驟是什么?還有就是細(xì)胞往支架材料上接種是怎么進(jìn)行的?一般多長時(shí)間就可以看到細(xì)胞有沒有接種上去。课也捎75%酒精滅菌,接種后培養(yǎng)36h后發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)液變黃、混濁,用倒置顯微鏡也看不到支架上有沒有細(xì)胞?不過感覺好像沒有哦!這到底是怎么回事。渴俏廴玖藛?怎么支架上會沒有一點(diǎn)點(diǎn)細(xì)胞呢,我接種量挺大的。而且,換液后,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中有許多小沫沫,好像是支架被分解的,具體我也搞不清楚。另外,我用的是蛋白支架,這種支架Biomaterials上好多文獻(xiàn)都有報(bào)道的。但我的怎么會出現(xiàn)這樣的情況,著急啊!請各位大俠幫幫忙! |
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木蟲 (著名寫手)
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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你的結(jié)果上看,肯定是染菌了。 呵呵,你要更具體點(diǎn),什么蛋白支架。你的蛋白支架可以泡酒精而不變形?可以采用環(huán)氧乙烷嗎?文獻(xiàn)中如果都是采用酒精滅菌的話,你可以嘗試在制備支架的時(shí)候,把蛋白溶液過濾,把交聯(lián)劑也過濾,然后可能會好一點(diǎn)。 |
銀蟲 (正式寫手)
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首先肯定是污染了,如果肉眼看到渾濁的話,顯微鏡下應(yīng)該看到蠕動的菌;細(xì)胞估計(jì)是全部死亡了,細(xì)菌感染后,細(xì)胞完全被裂解了。所以你看不到細(xì)胞。 滅菌的話,紫外照射加乙醇浸泡 如果要觀察細(xì)胞的話,一般接種1-2小時(shí)后觀察一下,細(xì)胞應(yīng)該貼附了。但是,由于你用的是支架材料,表面不平的話,一般顯微鏡也難以觀察到細(xì)胞?梢宰鰝(gè)簡單的熒光染色,在熒光顯微鏡下觀察。 |
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