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clbb1030木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】如何合成cDNA第二條鏈 已有3人參與
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| 想請教壇子里的高手,有人做過cDNA文庫嗎?我現(xiàn)在想合成cDNA的第二條鏈,可以采用什么方法呢?需要什么試劑?有合成第二條鏈的試劑盒嗎?還有就是,合成的雙鏈cDNA混合物還需要分開之后再連接載體嗎?還是用雙鏈混合物直接連載體,測序?謝謝! |
木蟲 (正式寫手)
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一個例子: cDNA第二鏈合成:按下表加樣,12℃溫育2h,22℃溫育2h First Strand reaction mixture 40μl 10×E.Coli DNA ligase Buffer 16μl 10mM dNTP mix 3μl 0.1M DTT 6μl E.Coli DNA ligase (60U/μl) 0.25μl 15U DNA Polymerase I (5U/μl) 10μl 50U RNase H (5U/μl) 0.03μl 1.6U H2O 84.72μl Final Volume 160μl 試劑盒也有,比如Promega的Universal RiboClone cDNA Synthesis System,里面就包含從RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈,以及合成cDNA第二鏈所需的試劑 |
木蟲 (小有名氣)
木蟲 (正式寫手)
木蟲 (小有名氣)
鐵蟲 (初入文壇)
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