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clbb1030木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】如何合成cDNA第二條鏈 已有3人參與
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| 想請教壇子里的高手，有人做過cDNA文庫嗎？我現(xiàn)在想合成cDNA的第二條鏈，可以采用什么方法呢？需要什么試劑？有合成第二條鏈的試劑盒嗎？還有就是，合成的雙鏈cDNA混合物還需要分開之后再連接載體嗎？還是用雙鏈混合物直接連載體，測序？謝謝！ |
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clbb1030
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3樓2010-09-09 12:24:12
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):熱心的ben 2010-09-10 15:28:38
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):熱心的ben 2010-09-10 15:28:38
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一個例子： cDNA第二鏈合成：按下表加樣，12℃溫育2h，22℃溫育2h First Strand reaction mixture 40μl 10×E.Coli DNA ligase Buffer 16μl 10mM dNTP mix 3μl 0.1M DTT 6μl E.Coli DNA ligase (60U/μl) 0.25μl 15U DNA Polymerase I (5U/μl) 10μl 50U RNase H (5U/μl) 0.03μl 1.6U H2O 84.72μl Final Volume 160μl 試劑盒也有，比如Promega的Universal RiboClone cDNA Synthesis System，里面就包含從RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈，以及合成cDNA第二鏈所需的試劑 |
2樓2010-09-09 11:56:02
ben1147
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4樓2010-09-10 13:16:53
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5樓2010-09-11 10:55:29
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