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[交流]
【求助/交流】關(guān)于MTT檢測(cè)淋巴細(xì)胞活性的若干問(wèn)題，請(qǐng)教各位大俠~~ 已有8人參與
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最近在做MTT的實(shí)驗(yàn)，有些問(wèn)題想請(qǐng)教各位，先謝謝大家了~~~ 另外不知道我的帖子有沒(méi)有重復(fù)，但這是我自己做的實(shí)驗(yàn)，有自己碰到的問(wèn)題，望大家?guī)蛶托〔�。�?br /> 1、染毒然后要離心去培養(yǎng)液，但我發(fā)現(xiàn)2000轉(zhuǎn)并不能是細(xì)胞完全沉到板底，有些孔還是懸著？另外，大家是用什么方法除去培養(yǎng)液的？我發(fā)現(xiàn)如果直接倒或者用移液槍吸的話，都會(huì)有誤差。 2、最后用酶標(biāo)儀檢測(cè)的波長(zhǎng)是490nm還是570nm？參考波長(zhǎng)是什么意思？ 3、調(diào)零孔和對(duì)照孔的作用是什么？最后的結(jié)果怎么表示？ 4、一般檢測(cè)出來(lái)的OD值在什么范圍比較可信？如果低了，是不是表示每孔加的細(xì)胞數(shù)太少了，一般一個(gè)空要多少個(gè)左右？ 5、還有我的反應(yīng)體積是100μL（培養(yǎng)基40+細(xì)胞懸液50+毒素10），有影響么？有些人用的是200μL。 6、MTT配置是，不用過(guò)濾關(guān)系大不大？ [ Last edited by hcming on 2010-9-13 at 18:31 ] |
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11樓2016-03-27 11:53:30
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1.染毒后一般不離心，這樣很麻煩，而且誤差相比會(huì)更大。我們一般都是用槍吸，吸的時(shí)候要慢，注意下面的結(jié)晶紫！ 2.對(duì)于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值；而對(duì)于SDS和酸化異丙醇，則選用570nm。 3.調(diào)零孔的作用是因?yàn)槊恳涣械陌遄佣即嬖谡`差，所以我們?cè)诿恳涣衅叫袠拥南旅娑荚O(shè)置一個(gè)調(diào)零孔，這樣的話，用酶標(biāo)儀測(cè)的時(shí)候，它就可以將你每一列的板子進(jìn)行綜合，這樣做可以減少誤差。 4.MTT實(shí)驗(yàn)吸光度最后要在0-0.7之間，超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系。收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無(wú)菌PBS填充）。 5.只要MTT工作濃度為5 mg/ml，即0.5%MTT，反應(yīng)體積是100還是200，應(yīng)該無(wú)所謂，不過(guò)這樣的話，你的細(xì)胞可能長(zhǎng)得慢點(diǎn)，少點(diǎn)。 6.不過(guò)濾不行，MTT對(duì)細(xì)菌非常敏感，我剛做的時(shí)候，調(diào)零孔的吸光值都很大，后來(lái)我在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)就是因?yàn)槿揪�，里面有紫色結(jié)晶。 |
2樓2010-09-13 18:46:58
3樓2010-09-13 19:17:02
sciencedj
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4樓2010-09-15 20:53:08
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