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[交流]
【求助/交流】關(guān)于MTT檢測淋巴細(xì)胞活性的若干問題，請教各位大俠~~ 已有8人參與
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最近在做MTT的實(shí)驗，有些問題想請教各位，先謝謝大家了~~~ 另外不知道我的帖子有沒有重復(fù)，但這是我自己做的實(shí)驗，有自己碰到的問題，望大家?guī)蛶托〔��！?br /> 1、染毒然后要離心去培養(yǎng)液，但我發(fā)現(xiàn)2000轉(zhuǎn)并不能是細(xì)胞完全沉到板底，有些孔還是懸著？另外，大家是用什么方法除去培養(yǎng)液的？我發(fā)現(xiàn)如果直接倒或者用移液槍吸的話，都會有誤差。 2、最后用酶標(biāo)儀檢測的波長是490nm還是570nm？參考波長是什么意思？ 3、調(diào)零孔和對照孔的作用是什么？最后的結(jié)果怎么表示？ 4、一般檢測出來的OD值在什么范圍比較可信？如果低了，是不是表示每孔加的細(xì)胞數(shù)太少了，一般一個空要多少個左右？ 5、還有我的反應(yīng)體積是100μL（培養(yǎng)基40+細(xì)胞懸液50+毒素10），有影響么？有些人用的是200μL。 6、MTT配置是，不用過濾關(guān)系大不大？ [ Last edited by hcming on 2010-9-13 at 18:31 ] |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+10):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:41:12
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+10):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:41:12
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1.染毒后一般不離心，這樣很麻煩，而且誤差相比會更大。我們一般都是用槍吸，吸的時候要慢，注意下面的結(jié)晶紫！ 2.對于DMSO，溶解后呈紫（紅）色，490nm有最大吸收值；而對于SDS和酸化異丙醇，則選用570nm。 3.調(diào)零孔的作用是因為每一列的板子都存在誤差，所以我們在每一列平行樣的下面都設(shè)置一個調(diào)零孔，這樣的話，用酶標(biāo)儀測的時候，它就可以將你每一列的板子進(jìn)行綜合，這樣做可以減少誤差。 4.MTT實(shí)驗吸光度最后要在0-0.7之間，超出這個范圍就不是直線關(guān)系。收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）。 5.只要MTT工作濃度為5 mg/ml，即0.5%MTT，反應(yīng)體積是100還是200，應(yīng)該無所謂，不過這樣的話，你的細(xì)胞可能長得慢點(diǎn)，少點(diǎn)。 6.不過濾不行，MTT對細(xì)菌非常敏感，我剛做的時候，調(diào)零孔的吸光值都很大，后來我在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)就是因為染菌，里面有紫色結(jié)晶。 |
2樓2010-09-13 18:46:58
3樓2010-09-13 19:17:02
4樓2010-09-15 20:53:08
dhd997
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