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wenruru新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助】急求：胰島素濃度檢測(cè)怎么做�。� 已有1人參與
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本人是做材料合成的，沒(méi)學(xué)過(guò)生物檢測(cè)，最近要做個(gè)胰島素濃度檢測(cè)（0~10mg/ml）的實(shí)驗(yàn)，有文獻(xiàn)里說(shuō)用Bio-Rad RC DC protein assay kit紫外吸收來(lái)測(cè)，這個(gè)方法我只是聽(tīng)說(shuō)，雖然自學(xué)了一下，但是還是不怎么明白，也有的文獻(xiàn)說(shuō)用Bradford法，是不是跟上面說(shuō)的是一個(gè)方法？求個(gè)具體的操作過(guò)程�。�！ 可以用考馬斯亮蘭法測(cè)嗎？下面得操作過(guò)程對(duì)不對(duì)？ （1）取16支試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分為兩組分別加入樣品、水和試劑，即用1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液給各試管分別加入：0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml，然后用無(wú)離子水補(bǔ)充到0.1ml。最后各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭G―250試劑，每加完一管，立即在旋渦混合器上混合（注意不要太劇烈，以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除）。未知樣品的加樣量見(jiàn)下表中的第8、9、10管。 （2）加完試劑2~5分鐘后，即可開始用比色皿，在分光光度計(jì)上測(cè)定各樣品在595nm處的光吸收值，空白對(duì)照為第1號(hào)試管，即0.1mlH2O加5.0mlG―250試劑。 （3）用標(biāo)準(zhǔn)胰島素量（mg）為橫座標(biāo)，用吸光度值為縱座標(biāo)，作圖，即得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。由此標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)出的未知樣品吸收值，即可查出未知樣品的含量。 疑問(wèn)： 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用到的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液，指的是胰島素的標(biāo)準(zhǔn)溶液，還是只能是g-球蛋白，比如牛血清蛋白？ [ Last edited by wenruru on 2010-9-14 at 18:12 ] |
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americanyk:編輯內(nèi)容 2010-09-15 07:59
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ELISA 或HPLC. [ Last edited by americanyk on 2010-9-15 at 07:59 ] |
2樓2010-09-14 14:33:23
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