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wenruru新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助】急求:胰島素濃度檢測怎么做? 已有1人參與
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本人是做材料合成的,沒學(xué)過生物檢測,最近要做個(gè)胰島素濃度檢測(0~10mg/ml)的實(shí)驗(yàn),有文獻(xiàn)里說用Bio-Rad RC DC protein assay kit紫外吸收來測,這個(gè)方法我只是聽說,雖然自學(xué)了一下,但是還是不怎么明白,也有的文獻(xiàn)說用Bradford法,是不是跟上面說的是一個(gè)方法?求個(gè)具體的操作過程!! 可以用考馬斯亮蘭法測嗎?下面得操作過程對不對? (1)取16支試管,1支作空白,3支留作未知樣品,其余試管分為兩組分別加入樣品、水和試劑,即用1.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液給各試管分別加入:0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml,然后用無離子水補(bǔ)充到0.1ml。最后各試管中分別加入5.0ml考馬斯亮蘭G―250試劑,每加完一管,立即在旋渦混合器上混合(注意不要太劇烈,以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除)。未知樣品的加樣量見下表中的第8、9、10管。 (2)加完試劑2~5分鐘后,即可開始用比色皿,在分光光度計(jì)上測定各樣品在595nm處的光吸收值,空白對照為第1號試管,即0.1mlH2O加5.0mlG―250試劑。 (3)用標(biāo)準(zhǔn)胰島素量(mg)為橫座標(biāo),用吸光度值為縱座標(biāo),作圖,即得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。由此標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)測出的未知樣品吸收值,即可查出未知樣品的含量。 疑問: 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用到的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液,指的是胰島素的標(biāo)準(zhǔn)溶液,還是只能是g-球蛋白,比如牛血清蛋白? [ Last edited by wenruru on 2010-9-14 at 18:12 ] |
金蟲 (小有名氣)
銀蟲 (正式寫手)
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ELISA 或HPLC. [ Last edited by americanyk on 2010-9-15 at 07:59 ] |
新蟲 (初入文壇)
銀蟲 (正式寫手)
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