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angel4219銅蟲 (小有名氣)
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【求助】100金幣求助MTT實(shí)驗(yàn)方案優(yōu)化！！
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A植物粗提物 B用EP管稱取 C用1mlDMSO溶解 D取1微升溶解液溶于細(xì)胞培養(yǎng)液 E用針頭式濾器過濾上述含藥培養(yǎng)母液 F取1.5ml母液加1.5ml新鮮培養(yǎng)液于15ml離心管中混合 G取F中混合培養(yǎng)液1.5ml再加1.5ml新鮮培養(yǎng)液于15ml離心管中混合 H重復(fù)f、g的步驟直到配成6個(gè)濃度梯度 I消化細(xì)胞，加入4ml培養(yǎng)液吹打。吹打均勻（約30次） J細(xì)胞計(jì)數(shù)（細(xì)胞密度40萬/ml） K取一定體積的細(xì)胞母液于15ml離心管中 L取新鮮培養(yǎng)液稀釋K中母液至細(xì)胞濃度為5萬/ml M 用1ml移液槍繼續(xù)吹打120次左右 N倒出M中培養(yǎng)液于排槍加樣槽 O 用排槍取100微升接種于96孔培養(yǎng)平板 P 培養(yǎng)16小時(shí)（細(xì)胞約占平板面積的60%） Q 加入H中6個(gè)已經(jīng)配好的藥液于96孔平板中 R培養(yǎng)48小時(shí) S 加入5微克/ml的MTT T 放入培養(yǎng)箱中4小時(shí) U吸出孔中液體加入200ul的DMSO V 放入酶標(biāo)儀中于490nm處檢測(cè) W記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果 我的實(shí)驗(yàn)步驟如上。現(xiàn)在的實(shí)驗(yàn)結(jié)果每次測(cè)出來都不盡如人意（因?yàn)檫@個(gè)粗提物是在美國的實(shí)驗(yàn)室做過抗腫瘤活性篩選的。）主要是IC50相差幾百倍！求教各位蟲友。對(duì)于各位的建議，我將發(fā)金幣于感謝！多謝大家提出寶貴意見！ |
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sassas
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2樓2010-10-09 09:13:36
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