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凌雪金蟲 (初入文壇)
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【求助/交流】為什么pUC18和DNA片段經(jīng)過Eco1和Hind3酶切后無法連接 已有2人參與
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| 為什么pUC18和DNA片段進(jìn)過Eco1和Hind3酶切后無法連接，大家?guī)臀曳治鲆幌�。謝謝 |
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tianyinghu
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2樓2010-10-09 15:24:02
tianyinghu
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3樓2010-10-09 15:26:59
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silicare(金幣+1):這個(gè)可以試 2010-10-09 18:10:07
silicare(金幣+1):這個(gè)可以試 2010-10-09 18:10:07
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出問題的時(shí)候，一般要重復(fù)一次。再重復(fù)的時(shí)候一定要加對照，你這兒應(yīng)該設(shè)三個(gè)對照： a, EcoRI 單酶切，然后連接轉(zhuǎn)化； b, HindIII 單酶切，然后連接轉(zhuǎn)化； c, 盡可能做一個(gè)陽性對照； 而且每個(gè)單酶切完了都要跑電泳看一看，是不是單酶切都切開了。因?yàn)殡p酶切跟單酶切的條帶電泳的時(shí)候基本上分辨不出來。所以，要是你的質(zhì)粒其中一個(gè)酶切位點(diǎn)發(fā)生突變，你是肯定連不上的。 祝好運(yùn)。 |
4樓2010-10-09 16:33:40
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