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laiyin_111木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】求助：乙酰膽堿酯酶溶液的配制問題 已有8人參與
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文獻上說來自電鰻的乙酰膽堿酯酶AChE (lyophilised powder; 292 U/mg solid; 394 U/mg protein)，請問它的單位是什么意思��？ 還有就是我如果購買500U/mg 的酶（或者是2000U/ mg) ，那么如何將它配制成1000U/mL的溶液呢？是直接用去離子水溶解還是其他什么緩沖液��？ 一般酶溶液制備后能存放多久呢？ |
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 乙酰膽堿酯酶 |
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laiyin_111
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10 U/mL儲備液：將500 U/mg的AChE灰白色固體粉末用緩沖液A溶解，定容至50 mL量瓶中，搖勻即得； 0.22 U/mL工作液：取220 μL的10 U/mL儲備液，用緩沖液B溶解，定容至10 mL量瓶中，搖勻即得。 其中，緩沖液A：50 mM Tris-HCl，pH 8.0； 稱取3.03 g Tris，精密稱定，加入到375 mL去離子水中，在電磁攪拌下滴加濃鹽酸至pH 8.0 (25℃)，再向其中加入去離子水，定容至500 mL量瓶中，即得。 緩沖液B：50 mM Tris-HCl，pH 8.0，含有0.1%（w/v）牛血清白蛋白（BSA），用來穩(wěn)定酶； 稱取0.05 g BSA，精密稱定后用緩沖液A溶解，定容至50 mL量瓶中，搖勻即得（注意BSA容易產(chǎn)生氣泡，所以定容時不要劇烈振搖，要輕輕操作，防止產(chǎn)生氣泡）。 |
9樓2013-04-24 21:14:24
laiyin_111
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3樓2010-10-17 21:56:31
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4樓2010-10-17 22:00:24
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
qinhy(金幣+1):多謝指教，歡迎常來藥學(xué)版！ 2010-12-12 18:35:08
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
qinhy(金幣+1):多謝指教，歡迎常來藥學(xué)版！ 2010-12-12 18:35:08
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第一個問題在網(wǎng)絡(luò)或課本上很容易查到，以后不許偷懶啊，呵呵。U----酶活力的度量單位。1961年國際酶學(xué)會議規(guī)定：1個酶活力單位是指在特定條件（25℃，其它為最適條件）下，在1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化1微摩爾底物的酶量，或是轉(zhuǎn)化底物中1微摩爾的有關(guān)基團的酶量。 第二個問題，U/mg是用來計算你買的酶的量，你要是用2000U/mg的酶配1000U/mL的溶液，就用2000U/mg乘以酶的質(zhì)量（說明書上有）再除以1000U/mL，就算出體積了。一般用PBS緩沖溶液，可能也有用其他的。pH中性左右，配完后冷凍保存，用的話，拿出一些于4攝氏度保存，盡量快點用，放置時間不宜過長。幾個月是沒問題的。 |
5樓2010-12-12 09:56:37
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