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ssyyll1019銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【請教】納米金 DNA修飾 已有8人參與
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大家好，在做DNA 修飾納米金顆粒的過程中碰到一些問題，再次想請教寫各位前輩們。 1.dna與納米金連接時(shí) 需要一定量的TCEP作為巰基得的還原劑，不少文章都注明了TCEP 不能過量很多，請問TCEP過量對dna 的連接會(huì)有怎樣的影響？ 2.對于粒徑14nm的膠體金顆粒，連接DNA前后 可以通過什么方法可以叫直觀的驗(yàn)證DNA確實(shí)連接上了？ 謝謝各位！ |
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第一個(gè)問題：TCEP是一種巰基還原劑，就是說能夠避免兩條DNA之間的巰基形成二巰基，從而不能與金表明發(fā)生Au-S反應(yīng)，但是加多了的話，又會(huì)使Au-S鍵發(fā)生還原，從而使已經(jīng)標(biāo)記上去的DNA被還原下來。 第二個(gè)問題：想知道金顆粒是否連接上DNA相當(dāng)簡單，你按照實(shí)驗(yàn)步驟做，如果到最后一步離心用帶100毫摩爾鹽的緩沖液重懸，你的金顆粒還是紅色的，沒有發(fā)生聚集就表明連接上去了，因?yàn)樵邴}老化的過程中，如果你的金顆粒沒有標(biāo)記上DNA的不會(huì)穩(wěn)定的，就會(huì)聚集了。 |
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1.不知TCEP還原劑的還原能力足夠還原Au-S鍵嗎？如果不夠強(qiáng)，再過量也不會(huì)把Au-S鍵還原的。另，TCEP是磷酸三氯乙酯，酸性試劑，不知過量的TCEP是否會(huì)破壞DNA中的堿性嘌呤雜環(huán)。 2.參考一篇納米金和晶狀體蛋白作用的文獻(xiàn)吧："Anti-glycation activity of gold nanoparticles", Nanomedicine:Nanotechnology, Biology, and Medicine, 2009, 5, 21-29. 文章中通過做光密度實(shí)驗(yàn)，檢測蛋白的聚集程度。然后通過動(dòng)態(tài)光散射測聚集體的直徑。如果納米金表面連上DNA鏈，那應(yīng)該會(huì)產(chǎn)生一定的聚集，同時(shí)聚集程度的輕重可以通過測粒徑來分析。另外，紫外可見吸收譜也有區(qū)別，因?yàn)槿绻屑{米金與DNA相連，分子中的芳香環(huán)的紫外吸收會(huì)產(chǎn)生變化的。但，我認(rèn)為只做UV測試不能100%表明納米金連上DNA了。UV的變化可能是因?yàn)锳u-S鍵的形成，也可能是DNA與納米金只是螯合而已，即并未形成化學(xué)鍵，只是電子間的相互吸引。 不好意思，對于生物我不太懂，只是從純化學(xué)角度看這個(gè)問題。很想互相學(xué)習(xí)，因?yàn)槲椰F(xiàn)在做蛋白的納米修飾。  |
14樓2010-12-01 11:35:31
2樓2010-11-15 10:05:30
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7樓2010-11-18 11:14:09
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