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fyw921銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【討論】F-actin 染色中為什么染不出纖維狀圖片 已有4人參與
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| 大家好，請(qǐng)問大家在做F-actin染色時(shí)為什么染不出纖維狀的圖片呢，我的實(shí)驗(yàn)步驟是細(xì)胞種植在12孔板的細(xì)胞爬片中，培養(yǎng)24 h，細(xì)胞用PBS洗3次，4%多聚甲醛固定10min。PBS洗3次，0.1% triton-100滲透3 min，PBS洗3次，1%BSA非特異性吸附10min，PBS洗3次加羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽5μl,室溫染色20min。封片后共聚焦下觀察，觀察不到纖維狀的F-actin，請(qǐng)大家?guī)兔Ψ治鲆幌略�。謝謝 |
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fyw921
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3樓2010-10-26 16:53:04
dj04164
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triton 時(shí)間短了 延長(zhǎng)到20-30min室溫或者4度過夜。 穿膜后不要用pbs洗了，全部改用0.1%triton+ 1%FBS洗，可以免掉封閉的步驟。鬼筆環(huán)肽也是拿這個(gè)液體稀釋。 染色和觀察過程需要避光。 注意激發(fā)光波長(zhǎng)選擇。 可以先在熒光顯微鏡上觀察一下染色效果再到共聚焦上看。pinhole開始別太小。 12孔板底太厚不便于觀察，建議使用共聚焦專用的培養(yǎng)皿。 |
2樓2010-10-26 11:02:54
dj04164
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4樓2010-10-26 23:40:26
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