 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2319 | 回復: 8 | ||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
wenmingfu木蟲 (著名寫手)
|
[交流]
【求助/交流】求動物組織DNA提取方法 已有3人參與
|
|||
| 求動物組織DNA提取方法 |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 DNA檢測 |
» 猜你喜歡
江蘇省優(yōu)青門檻
已經有20人回復
-
心好累。今年我們部門提交了18個項目。中了11了，可惜我的又掛了
已經有10人回復
-
植物學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有209人回復
-
面上項目計劃書
已經有7人回復
-
面上項目計劃書附件
已經有9人回復
-
面上項目計劃書系統(tǒng)狀態(tài)
已經有18人回復
-
NSFC-UNEP（與聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署）合作項目
已經有33人回復
-
和伊朗人合作
已經有32人回復
-
江蘇省自然基金
已經有7人回復
-
生命科學新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已經有8人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 動植物版塊版規(guī)意見征求，大家積極參與討論，有意義建議重獎！！
已經有15人回復
- 【求助/交流】求高人指點 關于國外實驗動物的飼料標準
已經有0人回復
- 【求助/交流】動物性產品形成的生化過程及其調控機理？
已經有1人回復
- 【求助/交流】熒光素（四環(huán)素 二甲酚橙 鈣黃綠素）的配比濃度和方法
已經有0人回復
- 【求助/交流】求動物百科書一本
已經有1人回復
- 【求助/交流】求測定腎組織醛糖還原酶活性方法
已經有2人回復
- 【求助/交流】甘油保存菌苗解凍注意事項
已經有5人回復
- 【求助/交流】求高手分析RNA電泳結果
已經有6人回復
- 【求助/交流】求高手分析RNA電泳結果
已經有6人回復
- 【求助/交流】求論文一篇
已經有4人回復
- 【求助/交流】關于材料植皮若干時間組織材料切片圖的分析
已經有2人回復
- 【求助/交流】快進來看��！顯微注射-轉基因
已經有1人回復
- 【求助/交流】求“動物細胞培養(yǎng)基本技術指南第五版”弗雷謝尼著的電子版
已經有7人回復
- 【求助】底棲動物鑒定時不認識物種還求高手
已經有4人回復
- 【求助/交流】求細胞培養(yǎng)中試實驗室的建設要求
已經有2人回復
- 【求助/交流】求區(qū)別植物與動物的基因序列或基因名
已經有2人回復
- 【求助/交流】關于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)酵母
已經有16人回復
zhanglin_84
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 14 (小學生)
- 貴賓: 0.001
- 金幣: 1347.8
- 散金: 304
- 紅花: 4
- 帖子: 688
- 在線: 151.4小時
- 蟲號: 1000126
- 注冊: 2010-04-18
- 專業(yè): 生理生態(tài)學
4樓2010-11-02 21:55:47
★
dhd997(金幣+1):熱心鼓勵。 2010-11-02 17:12:36
wenmingfu(金幣+2): 2010-11-03 15:20:51
wenmingfu(金幣+5): 2011-03-24 21:58:20
dhd997(金幣+1):熱心鼓勵。 2010-11-02 17:12:36
wenmingfu(金幣+2): 2010-11-03 15:20:51
wenmingfu(金幣+5): 2011-03-24 21:58:20
|
Lysis Buffer 1. 100 mM Tris---HCL PH8.3 (50 ml 1M Tris) 2. 500 mM KCL (18.73 g ) 3. 0.1% Gelatin (0.5 g ) 4. 0.45% NP40 (2.25 ml ) 5. 0.45% Tween---20 (2.25 ml ) + H2O =500ml 用的時候加入PK 水浴55度過夜。第二天100度滅活，冷卻至4度后可以直接進行PCR鑒定 |
2樓2010-11-02 15:20:56
fzfangtao
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 3740.5
- 散金: 17
- 紅花: 2
- 帖子: 599
- 在線: 327.1小時
- 蟲號: 1109163
- 注冊: 2010-09-27
- 專業(yè): 植物進化生物學
★ ★ ★
dhd997(金幣+3):謝謝交流。 2010-11-02 19:13:50
wenmingfu(金幣+3): 2010-11-03 15:21:24
wenmingfu(金幣+3): 2011-03-24 21:57:55
dhd997(金幣+3):謝謝交流。 2010-11-02 19:13:50
wenmingfu(金幣+3): 2010-11-03 15:21:24
wenmingfu(金幣+3): 2011-03-24 21:57:55
|
1. 組織樣品和培養(yǎng)細胞的裂解 （1）組織樣品 ① 將lg新鮮切取的組織在液氮中速凍，并用液氮預冷的研缽研磨。 ② 液氮揮發(fā)，將組織粉末一點一點地加入盛有10倍體積裂解液的燒杯中，使其分散于裂解液表面，后振搖燒杯使粉末浸沒。 ③ 將懸液轉移至50ml三角瓶中，并于37℃溫育1h，立即進行步驟1.2.。 （2）培養(yǎng)細胞 ①單層培養(yǎng)細胞 i.從孵箱中取出長滿單層細胞的培養(yǎng)皿，迅速吸去培養(yǎng)液，用冰冷的TBS洗2次，加入1ml新鮮的冰冷的TBS。 ii. 用橡膠刮棒將細胞刮入1ml TBS中，用吸管將細胞懸液轉移到冰上的離心管中。用0.5 ml冰冷的TBS沖洗培養(yǎng)皿，后并入離心管的細胞懸液。 iii.于4℃3000r/min離心10min以收集細胞。 iv. 將細胞重懸于5倍~10倍體積的冰冷TBS中并再度離心。 v. 用1 ml TE（PH8.0）重新懸浮細胞，轉移至50 ml三角瓶中。 vi. 每毫升細胞懸液加10 ml裂解緩沖液，于37℃溫育1h，立即進行步驟1.2.。 ②懸浮培養(yǎng)的細胞 i.將細胞轉移至離心管，于4℃3000r/min離心10min以收集細胞，吸去上清。 ii.用1倍體積冰冷的TBS重懸細胞并再度離心，吸去上清，小心地再次重懸細胞于冰冷的TBS中，離心收集細胞。 iii.去上清，用1ml TE（PH8.0）重新懸浮細胞，轉移至50 ml三角瓶中。 iv.每毫升細胞懸液加10 ml裂解緩沖液，于37℃溫育1h，立即進行步驟1.2.。 2.將裂解液轉移至離心管中，裂解液不能超過1/3體積。 3.加入蛋白酶K（20mg/ml）至終濃度100µg/ml。用一滅菌玻璃棒溫和地將酶混入細胞裂解液中。 4.將細胞裂解液置于50℃水浴中保溫3 h，并不時振搖。 5.將溶液冷卻至室溫，加入等體積的平衡酚，將離心管置于渦旋器上,使離心管緩慢顛轉10min 以溫和地混合兩相。 6.室溫下，6500r/min離心15 min以分離兩相。 7.用寬口移液管將黏滯的水相轉移至另一離心管。 8.苯酚抽提兩次，收集水相。 9.加入0.2倍體積10mol/L醋酸銨及2倍體積無水乙醇，旋轉離心管直至溶液徹底混勻為止。 10.DNA隨即形成沉淀，在室溫下6500r/min離心5 min，收集沉淀。 11.用70%乙醇洗滌DNA沉淀2次，按步驟1.10.離心收集DNA。 12.盡可能吸去殘余乙醇,于室溫下，將DNA沉淀置于敞開的管內，直至乙醇揮發(fā)殆盡。 13.按每0.1m1細胞(步驟1.1)加入1ml TE溶解DNA，將DNA溶液儲存于4℃。 14.用紫外分光光度法或二苯胺顯色法檢測DNA含量。詳見本實驗第二部分。 |
3樓2010-11-02 17:20:28
5樓2010-11-03 00:02:03
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料工程294求調劑 +4 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調劑一志愿海大，0703化學學碩304分，有大創(chuàng)項目，四級已過 +7 | 幸運哩哩 2026-03-22 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 286求調劑 +4 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 352分 化工與材料 +5 | 海納百川Ly 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 348求調劑 +4 | 小懶蟲不懶了 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調劑 +7 | 安憶靈 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 325求調劑 +5 | 李嘉圖·S·路 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601求調劑總分293英一數(shù)二 +4 | 鋼鐵大炮 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調劑 +9 | Mr. Z 2026-03-25 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 各位老師您好：本人初試372分 +5 | jj涌77 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 340求調劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 335求調劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 284求調劑 +3 | yanzhixue111 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學085700資源與環(huán)境，總分308求調劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學070300 學碩336求調劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|