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求知的學(xué)生金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】SDS-PAGE檢測蛋白純度 已有11人參與
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| 大家好,我現(xiàn)在有一些蛋白質(zhì)的凍干粉,想用SDS-PAGE測一下純度,應(yīng)該如何做?膠跑完之后,該如何處理,怎么計算濃度?望不吝賜教,謝謝! |
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金蟲 (小有名氣)
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首先,你需要將你的蛋白溶解!然后加熱處理之后電泳,電泳之后染色,通過相關(guān)儀器或者直接相機照相,利用bandscan來估計蛋白純度! 2. 如果你想利用SDS-PAGE來測定蛋白濃度話,建議你在電泳時,在你蛋白旁邊的泳道點一個BSA梯度(BSA濃度是確定的!例如你配一個0.5mg/ml),分別點1ug,2ug,4ug,6ug,8ug,10ug!電泳之后照相,利用PS,根據(jù)BSA比對的方法!首先將BSA的標(biāo)準(zhǔn)曲線做出來,然后根據(jù)你的protein的累計密度計算出他的質(zhì)量,進而算出他的濃度!這種做法比一般的BSA比對方法可能更準(zhǔn)確點!但是,利用SDS-page來測定蛋白濃度只是定性實驗,如果想準(zhǔn)確定量測定,建議你還是換bradford法或UV280等方法! 好吧,就這么多吧,希望對你有用! |

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[基金申請]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC,還能修改嗎?
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