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求知的學生金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】SDS-PAGE檢測蛋白純度 已有11人參與
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| 大家好，我現(xiàn)在有一些蛋白質(zhì)的凍干粉，想用SDS-PAGE測一下純度，應(yīng)該如何做？膠跑完之后，該如何處理，怎么計算濃度？望不吝賜教，謝謝！ |
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首先，你需要將你的蛋白溶解！然后加熱處理之后電泳，電泳之后染色，通過相關(guān)儀器或者直接相機照相，利用bandscan來估計蛋白純度！ 2. 如果你想利用SDS-PAGE來測定蛋白濃度話，建議你在電泳時，在你蛋白旁邊的泳道點一個BSA梯度（BSA濃度是確定的！例如你配一個0.5mg/ml），分別點1ug,2ug,4ug,6ug,8ug,10ug！電泳之后照相，利用PS，根據(jù)BSA比對的方法！首先將BSA的標準曲線做出來，然后根據(jù)你的protein的累計密度計算出他的質(zhì)量，進而算出他的濃度！這種做法比一般的BSA比對方法可能更準確點！但是，利用SDS-page來測定蛋白濃度只是定性實驗，如果想準確定量測定，建議你還是換bradford法或UV280等方法！ 好吧，就這么多吧，希望對你有用！ |
21樓2013-05-25 08:29:31
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