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gaogaoxing

鐵桿木蟲 (正式寫手)

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[交流] 【求助/交流】BSA法測蛋白質(zhì)濃度的原理和方法已有10人參與

求助BSA法測蛋白質(zhì)濃度的原理和方法
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1樓 2010-11-08 11:15:06

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xhjggl

木蟲 (正式寫手)

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專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)

上海生工有 021-37772436

★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):感謝提供 2010-11-19 13:37:26

Bradford Protein Assay Kit
Bradford 蛋白質(zhì)定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明：Bradford試劑蛋白定量是一種快速，即用型的總量蛋白光學(xué)定量方法，在酸性條件下，考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合，導(dǎo)致最大吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm，同時(shí)顏色也由棕色變?yōu)樗{(lán)色,該藍(lán)色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合，測量在595 nm處的吸收值，在建立由一系列稀釋的BSA建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下，蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線而確定。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、檢測速度快，10-20個(gè)樣品只需不足10分鐘即可完成；
2、靈敏度高，最小檢測蛋白量達(dá)到0.2微克，待測樣品體積為1-20ul；
3、在10-150微克/毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系；
4、與還原性糖和還原性巰基試劑兼容；
5、可以采用分光光度法或酶標(biāo)板法對蛋白進(jìn)行定量。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK3031 1000 Assays 150 生工
SK3033 1000Assays +10Microplates 230 生工

Modified Bradford Protein Assay Kit
改良型Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明：在使用常規(guī)Bradford試劑進(jìn)行蛋白定量時(shí)，考馬斯亮蘭G-250染料分子之間，以及G-250與蛋白質(zhì)復(fù)合物之間會(huì)發(fā)生聚集，隨著時(shí)間的延長，產(chǎn)生可見的易沉降的顆粒，使得在595nm處測定的吸光度值A(chǔ)595時(shí)，蛋白質(zhì)濃度的定量偏低。針對此種情況，本試劑盒通過添加特殊的試劑，使得考馬斯亮蘭G-250染料分子之間，以及G-250與蛋白質(zhì)復(fù)合物在30分鐘內(nèi)不容易發(fā)生沉降，從而提高了測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。使得大量樣品的定量變的從容不迫。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.在30分鐘內(nèi)，G-250染料分子和G-250與蛋白質(zhì)復(fù)合物不容易發(fā)生沉淀；
2.無論是分光光度法或酶標(biāo)板法都有大小兩種定量范圍的操作方法；
3.還能夠適應(yīng)疏水的膜或粘蛋白的定量；
4.比較合適于從容不迫地進(jìn)行大量樣品的定量；
5.與常規(guī)的Bradford法相比，線形關(guān)系更佳，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK3041 1000 Assays 360 生工

BCA Protein Assay Kit
BCA蛋白質(zhì)定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明：BCA法是理想的蛋白質(zhì)定量方法，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA特異地與Cu1結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有最大的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比，可以根據(jù)吸收值測定蛋白質(zhì)濃度。該測定方法靈敏度高，操作簡單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性俱佳，并且受干擾物質(zhì)去垢劑等影響小。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.準(zhǔn)確靈敏，線性范圍廣，BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是25－500μg/ml;
2.快速：45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便;
3.不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響;
4.檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán),可以酶標(biāo)板法或分光光度計(jì)法測定蛋白質(zhì)濃度。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK3021 500 Assays 450 生工

Modified BCA Protein Assay Kit
改良型BCA蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明：在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)和Cu2+離子結(jié)合并將其還原成Cu+離子。BCA與Cu+離子結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有最大光吸收并與蛋白質(zhì)濃度成線性關(guān)系，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)的濃度。與Lowery法相比，BCA法最大的優(yōu)點(diǎn)就是不受去垢劑的影響。但樣品中若存在還原劑，同樣可以將Cu2+離子還原成Cu+離子，從而提高光吸收值。本試劑盒中的試劑C可以有效地降低蛋白質(zhì)抽提樣品中殘留的還原劑對蛋白質(zhì)濃度檢測的干擾。當(dāng)樣品中的DTT濃度≤5mM或β-巰基乙醇濃度≤10mM時(shí)，蛋白質(zhì)濃度的測定不會(huì)受影響。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.在樣品中的DTT濃度≤5mM或β-巰基乙醇濃度≤10mM時(shí)，光吸收值不受影響；
2.可以采用酶標(biāo)板法或分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，定量范圍為25-1000ug/ml；
3.需要的樣品體積5-25ul；
4.不受樣品中低濃度的離子型和非離子型去污劑影響。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK3051 500 Assays 500 生工

Micro BCA Protein Assay Kit
BCA法微量蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明:BCA法是理想的蛋白質(zhì)定量方法，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有最大的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。該測定方法靈敏度高，操作簡單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性俱佳，并且受干擾物質(zhì)去垢劑等影響小。本試劑盒適用于微量蛋白質(zhì)濃度的測定。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.適用于濃度比較稀的蛋白質(zhì)樣品的定量；
2.定量范圍：分光光度法0.5-20μg/ml；酶標(biāo)板法2-40μg/ml；
3.與離子型或非離子型去污試劑兼容；
4.檢測不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬氏亮藍(lán)。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK3061 1250 Assays 360 生工

Lowry Protein Assay Kit
福林酚蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明: 在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物。此絡(luò)合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑（Folin 試劑）還原，產(chǎn)生深藍(lán)色（磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物），這種深藍(lán)色的復(fù)合物在745-750nm處有最大吸收峰，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。此法操作簡便，靈敏度比雙縮脲法高100 倍。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1．不同蛋白質(zhì)分子之間的變異系數(shù)教小;
2．在40分鐘內(nèi)可以完成蛋白質(zhì)定量過程;
3．有酶標(biāo)板法和分光光度法兩種定量程序
4．定量范圍為5-100ul/ML蛋白質(zhì)。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK4031 1000 Assays 150 生工
SK4033 1000 Assays +10Microplates 230 生工

Stable Lowry Protein Assay Kit
穩(wěn)定型Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明: 堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物。此絡(luò)合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑（Folin 試劑）還原，產(chǎn)生深藍(lán)色（磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物），顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。此法靈敏度比雙縮脲法高100 倍，定量范圍為5-100μg/ml蛋白質(zhì)。經(jīng)典的Lowry法的主要缺點(diǎn)是由Reagent A和B按照一定比例配置成的堿性銅試劑（Reagent C）不穩(wěn)定,需要當(dāng)天配制，經(jīng)典的Lowry法產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定性也不高，在反應(yīng)20-120min內(nèi)變化9.2%。本試劑盒采用一種改進(jìn)的即用型穩(wěn)定的堿性銅試劑代替經(jīng)典Lowry法的Reagent A；B；C，使得實(shí)驗(yàn)操作更加的簡單便捷，反應(yīng)產(chǎn)生的藍(lán)色復(fù)合物能夠穩(wěn)定存在至少2小時(shí)。而且該穩(wěn)定型堿性銅試劑在4度，避光的條件下可穩(wěn)定保存至少6個(gè)月以上，實(shí)驗(yàn)制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線與經(jīng)典方法基本吻合。用酶標(biāo)板使用1000次或分光光度法100次。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．即用型而且穩(wěn)定的堿性銅試劑，使用更加方便；
2．有離心管法和酶標(biāo)板法兩種定量方法；
3．蛋白質(zhì)濃度的線性范圍在5-100μg/ml；
4．高的靈敏性保證了低蛋白質(zhì)濃度樣品的精確定量。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK4051 1000 Assays 260 生工

Modified Lowry Protein Assay Kit
改良型Lowry法蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品說明: 在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物。此絡(luò)合物將磷鉬酸-磷鎢酸試劑（Folin 試劑）還原，產(chǎn)生深藍(lán)色（磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物），顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。此法操作簡便，靈敏度比雙縮脲法高100 倍，定量范圍為5-100μg/ml蛋白質(zhì)。通過特殊的沉淀試劑可以完全去除蛋白質(zhì)樣品中的大部分干擾物質(zhì),而蛋白質(zhì)的損失幾乎為零.保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和提高了定量的靈敏度。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1．特殊的沉淀試劑去除蛋白質(zhì)樣品中干擾物質(zhì)，比常規(guī)lowry有更好的線性關(guān)系，結(jié)果更準(zhǔn)確;
2．不同蛋白質(zhì)分子之間的變異系數(shù)教小;
3．有酶標(biāo)板法和分光光度法兩種定量程序;
4．定量范圍為5-100μg/ml蛋白質(zhì)。
編號包裝價(jià)格產(chǎn)地
SK4041 1000 Assays 180 生工

非干擾型蛋白濃度測定試劑盒
Non-Interference Protein Assay Kit
產(chǎn)品說明: 非干擾型蛋白質(zhì)定量試劑盒是排除決大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑的干擾的光學(xué)定量方法，它可以去除離子，非離子，兩性去污試劑，還原試劑，螯合試劑，Tris ，糖，鹽酸胍等變性試劑，對于在Laemmeli buffer等蛋白質(zhì)上樣緩沖液，2D sample extraction buffer,高濃度的β-mercaptoethanol (<15%) ,脂質(zhì)體中的蛋白質(zhì)也可以定量,蛋白質(zhì)量在0.5-50µg 之間有良好的線性關(guān)系,需要的樣品體積在1-50µl ,特殊的沉淀試劑可以去除掉絕大多數(shù)干擾物質(zhì),被沉淀的蛋白質(zhì)與含有銅的堿性物質(zhì)相混合,未與蛋白質(zhì)相結(jié)合銅在被還原為一價(jià)后與特定的生色試劑反應(yīng),產(chǎn)生特定的480nm吸收波長,所以隨著蛋白質(zhì)的濃度增加,,未與蛋白質(zhì)結(jié)合銅相應(yīng)減少,這樣特定的吸收波長的吸收值與溶液中的蛋白質(zhì)濃度成反比,這種蛋白質(zhì)定量方法不受氨基酸副鏈和蛋白質(zhì)的種類的影響，本試劑盒可以做250次微量定量。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1．整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程大約只需要40分鐘左右;
2．定量過程不受到非蛋白的去污試劑，還原試劑，螯合試劑，Tris ，糖，變性試劑，化學(xué)藥品，抗生素等的影響;
3．定量范圍在0.5-50µg，只需要1-50ul的樣品;
4．比較適合于對2D電泳用的細(xì)胞或組織裂解液所提取的蛋白樣品直接進(jìn)行定量。
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SK3071 250 Assays 500 生工

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17樓2010-11-18 21:54:38

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lywang2008

至尊木蟲 (知名作家)

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專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

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gaogaoxing(金幣+1):謝謝參與
dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流。 2010-11-11 10:17:50

將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA和你經(jīng)常使用的標(biāo)準(zhǔn)ladder，以及你要定量的蛋白放在一個(gè)gel上跑膠，對比它們的條帶，然后計(jì)算出目標(biāo)蛋白的含量。

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4樓2010-11-11 06:14:49

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tianhuijuan

金蟲 (小有名氣)

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gaogaoxing(金幣+1):多謝！ 2010-11-08 20:51:32

將未知蛋白條帶與一些列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA的條帶對比，粗略定量。

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2樓2010-11-08 12:55:57

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gaogaoxing

鐵桿木蟲 (正式寫手)

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3樓2010-11-10 22:45:46

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henkally

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dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流。 2010-11-11 10:17:58

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5樓2010-11-11 09:58:37

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gaogaoxing

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引用回帖:

Originally posted by henkally at 2010-11-11 09:58:37:
樓上說得不對，LZ去碧云天下個(gè)BCA測蛋白濃度試劑盒的說明書，里面原理講得很清楚

多謝啦！

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6樓2010-11-11 13:33:23

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2009227004

金蟲 (正式寫手)

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silicare(金幣+1):謝謝分享 2010-11-11 17:12:42

我做的是用lory法，利用一定濃度范圍內(nèi)的五六個(gè)濃度的BSA測量其吸光值，作出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將將目的蛋白的吸光值（如果太高了可以稀釋下）調(diào)到這個(gè)曲線范圍上，這樣就可以得出該蛋白的濃度�。�！

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當(dāng)別人都在假裝正經(jīng)的時(shí)候，我就假裝不正經(jīng)。

7樓2010-11-11 13:59:22

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jhu132llh

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青春的歲月，我們身不由己，只因這胸中燃燒的夢想！

8樓2010-11-11 15:59:11

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匿名

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9樓2010-11-12 04:42:35

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herenren

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silicare(金幣+1):大家都是紫外，建議你多來小木蟲學(xué)習(xí)學(xué)習(xí) 2010-11-12 12:22:48

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10樓2010-11-12 11:44:24

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