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魑魅-魍魎

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[交流] 【求助/交流】關(guān)于引物

現(xiàn)在，我有了載體，有了目的基因的片段。我的目的是為了把這段基因連到載體上讓其表達(dá)。我想知道的是，我是否應(yīng)該先大量制備這種載體和目的基因片段？如果是，那么，載體是要通過(guò)大量搖瓶培養(yǎng)導(dǎo)入載體的菌體然后裂解獲得是嗎？目的基因片段（外公司合成）是要經(jīng)過(guò)PCR大量合成對(duì)吧？

問(wèn)題來(lái)了，這段基因片段引物問(wèn)題，我已經(jīng)有了酶切位點(diǎn)。這段引物上有多少要與目的基因片段重合？3‘端是不是要留有一部分不與目的片段重合？這段不重合的大約要多少BP？

當(dāng)我把重組子做好之后如何檢驗(yàn)是否連接成功？沒(méi)有誘導(dǎo)檢測(cè)位點(diǎn)，IPTG什么的肯定不能用。用PCR應(yīng)該也可以把？問(wèn)題又來(lái)了，這時(shí)的PCR所用引物可以是前面擴(kuò)增基因片段的引物嗎？如果可以，那么再返回前面設(shè)計(jì)引物的階段，我這個(gè)引物要與載體上片段重合多少BP？要有游離端嗎？

糾結(jié)了一晚上，依然百思不得其解，求高人指點(diǎn)迷津~~~~

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1樓 2010-11-09 11:06:58

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魑魅-魍魎

新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-09 11:12:40:
樓主應(yīng)該好好去看一下分子克隆指南

所有的問(wèn)題都可以得到解答

不知道這位朋友有沒(méi)有看過(guò)，解釋一下唄，分子克隆我看過(guò)了，沒(méi)有尋著答案，我看的是零四年版本，不知這位兄臺(tái)的是什么版本

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4樓2010-11-09 15:42:10

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三磷酸腺苷

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流

樓主應(yīng)該好好去看一下分子克隆指南

所有的問(wèn)題都可以得到解答

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2樓2010-11-09 11:12:40

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shan-sa

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dhd997:編輯內(nèi)容 2010-11-09 12:20

問(wèn)問(wèn)師兄師姐的哪個(gè)不知道

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-9 at 12:20 ]

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3樓2010-11-09 11:21:47

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魑魅-魍魎

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Originally posted by shan-sa at 2010-11-09 11:21:47:
問(wèn)問(wèn)師兄師姐的哪個(gè)不知道

[ Last edited by dhd997 on 2010-11-9 at 12:20 ]

哎可悲的師兄師姐都說(shuō)自己沒(méi)設(shè)計(jì)過(guò)引物

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5樓2010-11-09 15:42:49

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