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kaola714417新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】求助包涵體問題 已有2人參與
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| 我的包涵體蛋白用尿素變性溶解后，經(jīng)過PH=8的lysis buffer透析后，想要上柱純化，可是在透析后，經(jīng)變性溶解的蛋白又沉淀出來，無法上柱純化，請問高人這是什么原因？怎么解決？ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+1):good！ 2010-11-11 21:46:24
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+1):good！ 2010-11-11 21:46:24
| 尿素溶解的蛋白為變性蛋白，也就類似于直鏈狀態(tài)，沒有三維結(jié)構(gòu)，而你透析除尿素，就是在做復(fù)性，也就是蛋白質(zhì)自己折疊，回復(fù)活性，當(dāng)然也有自己折疊疊錯(cuò)了的，也就是沒有回復(fù)到自然構(gòu)象上去的蛋白（無活性），而其一般來說這樣的蛋白占了絕大數(shù)，一般復(fù)習(xí)成功的得率也就40%，所以LZ的蛋白幾乎都是沉淀，所以建議LZ先做復(fù)性優(yōu)化，選好條件再優(yōu)化，具體的可以上網(wǎng)看看，有很多資料的。 |
2樓2010-11-11 20:22:26
kaola714417
新蟲 (初入文壇)
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3樓2010-11-12 18:31:58
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