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kaola714417新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】求助包涵體問題 已有2人參與
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| 我的包涵體蛋白用尿素變性溶解后,經(jīng)過PH=8的lysis buffer透析后,想要上柱純化,可是在透析后,經(jīng)變性溶解的蛋白又沉淀出來,無法上柱純化,請問高人這是什么原因?怎么解決? |
新蟲 (初入文壇)
| 尿素溶解的蛋白為變性蛋白,也就類似于直鏈狀態(tài),沒有三維結(jié)構(gòu),而你透析除尿素,就是在做復(fù)性,也就是蛋白質(zhì)自己折疊,回復(fù)活性,當(dāng)然也有自己折疊疊錯了的,也就是沒有回復(fù)到自然構(gòu)象上去的蛋白(無活性),而其一般來說這樣的蛋白占了絕大數(shù),一般復(fù)習(xí)成功的得率也就40%,所以LZ的蛋白幾乎都是沉淀,所以建議LZ先做復(fù)性優(yōu)化,選好條件再優(yōu)化,具體的可以上網(wǎng)看看,有很多資料的。 |
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