 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 897 | 回復(fù): 1 | |||
zxyjenny6新蟲 (小有名氣)
|
[交流]
【求助/交流】pcr、酶切問題，急！ 已有1人參與
|
|
各位蟲蟲，緊急求助！ 構(gòu)建重組質(zhì)粒，做了半年多的實驗，還是一點進展沒有，最近又遇到一些新問題： 1。 pcr不穩(wěn)定，或出現(xiàn)雜帶或P不出來。我用的是高保真的酶，之前一段時間p出來都很穩(wěn)定，(先配大的體系然后分裝成25的體系去p)只有一特異性條帶。但最近做的時候如果是配成大體系再分裝就會p不出來（可以確定加的試劑和量絕對不錯，與以前一樣），只配25的就能p出來，不過條帶有兩條，一條很亮，這條亮的條帶很近的下方可以看到另一條帶，較弱，但是很特異，而且跟那個亮的大小差不了多少，這是為什么？ 2。 質(zhì)粒雙酶切跑膠，在比預(yù)期大小要小的位置出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，并且加樣孔稍有殘留，是什么原因？酶切時間是4個小時，體系是20，各加了1的酶。之前用這個體系相同時間酶切質(zhì)粒都能得到大小符合要求的線性的結(jié)果，這次有所不同的是換了個提質(zhì)粒的試劑盒，提的質(zhì)粒量要比以前亮的多。是因為載體過多沒有切完全還是因為質(zhì)粒沒提好、混有雜質(zhì)？ 3。 pcr產(chǎn)物割膠回收以后酶切出現(xiàn)多條帶，最亮的條帶下有較弱的特異性條帶，并且靠得很近，單靠marker也分辨不出來哪條才是目的條帶。以前也是相同的條件只有一條條帶的。操作中應(yīng)該也不可能污染到其他的雜質(zhì)。不知道為什么出現(xiàn)這種情況，望高手指教！ 做了這么久，突然出現(xiàn)這種問題，十分著急，求助！  |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有279人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
jhu132llh
榮譽版主 (知名作家)
大洪
- MolEPI: 14
- 應(yīng)助: 63 (初中生)
- 貴賓: 1.07
- 金幣: 11622.1
- 散金: 796
- 紅花: 30
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 5128
- 在線: 317小時
- 蟲號: 1095066
- 注冊: 2010-09-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 生殖生物學
- 管轄: 動植物
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+4):good！ 2010-11-16 22:53:52
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+4):good！ 2010-11-16 22:53:52
|
1。 pcr不穩(wěn)定，或出現(xiàn)雜帶或P不出來。我用的是高保真的酶，之前一段時間p出來都很穩(wěn)定，(先配大的體系然后分裝成25的體系去p)只有一特異性條帶。但最近做的時候如果是配成大體系再分裝就會p不出來（可以確定加的試劑和量絕對不錯，與以前一樣），只配25的就能p出來，不過條帶有兩條，一條很亮，這條亮的條帶很近的下方可以看到另一條帶，較弱，但是很特異，而且跟那個亮的大小差不了多少，這是為什么？ 答：（1）什么大體系分到小體系PCR不出是不可能的，只有可能是你分裝的過程中的試劑盒手法出現(xiàn)點問題，排查一下吧。 （2）那是影子帶，常常出現(xiàn)，加入一定量的輔助劑有助于解決這個問題如BSA,Triton-X100，等等，具體可以查看《分子克隆實驗指南》一書。 |
2樓2010-11-16 13:00:06
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zxyjenny6 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +4 | RuiFairyrui 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求調(diào)劑 +6 | 芋泥小鈴鐺 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學求調(diào)劑 +9 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學求調(diào)劑 +4 | 起個名咋這么難 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +4 | 我真的很想學習 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | question挽風 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | 江辭666 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +9 | 稻妻小編 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪！？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 上海電力大學材料防護與新材料重點實驗室招收調(diào)劑研究生（材料、化學、電化學，環(huán)境） +4 | 我愛學電池 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +5 | Sxy112 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|