 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 898 | 回復: 1 | |||
[交流]
【求助/交流】pcr、酶切問題，急！ 已有1人參與
|
|
各位蟲蟲，緊急求助！ 構建重組質粒，做了半年多的實驗，還是一點進展沒有，最近又遇到一些新問題： 1。 pcr不穩(wěn)定，或出現(xiàn)雜帶或P不出來。我用的是高保真的酶，之前一段時間p出來都很穩(wěn)定，(先配大的體系然后分裝成25的體系去p)只有一特異性條帶。但最近做的時候如果是配成大體系再分裝就會p不出來（可以確定加的試劑和量絕對不錯，與以前一樣），只配25的就能p出來，不過條帶有兩條，一條很亮，這條亮的條帶很近的下方可以看到另一條帶，較弱，但是很特異，而且跟那個亮的大小差不了多少，這是為什么？ 2。 質粒雙酶切跑膠，在比預期大小要小的位置出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，并且加樣孔稍有殘留，是什么原因？酶切時間是4個小時，體系是20，各加了1的酶。之前用這個體系相同時間酶切質粒都能得到大小符合要求的線性的結果，這次有所不同的是換了個提質粒的試劑盒，提的質粒量要比以前亮的多。是因為載體過多沒有切完全還是因為質粒沒提好、混有雜質？ 3。 pcr產物割膠回收以后酶切出現(xiàn)多條帶，最亮的條帶下有較弱的特異性條帶，并且靠得很近，單靠marker也分辨不出來哪條才是目的條帶。以前也是相同的條件只有一條條帶的。操作中應該也不可能污染到其他的雜質。不知道為什么出現(xiàn)這種情況，望高手指教！ 做了這么久，突然出現(xiàn)這種問題，十分著急，求助！  |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有289人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
-
留學--博士招生
已經有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
jhu132llh
榮譽版主 (知名作家)
大洪
- MolEPI: 14
- 應助: 63 (初中生)
- 貴賓: 1.07
- 金幣: 11622.1
- 散金: 796
- 紅花: 30
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 5128
- 在線: 317小時
- 蟲號: 1095066
- 注冊: 2010-09-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 生殖生物學
- 管轄: 動植物
★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+4):good！ 2010-11-16 22:53:52
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+4):good！ 2010-11-16 22:53:52
|
1。 pcr不穩(wěn)定，或出現(xiàn)雜帶或P不出來。我用的是高保真的酶，之前一段時間p出來都很穩(wěn)定，(先配大的體系然后分裝成25的體系去p)只有一特異性條帶。但最近做的時候如果是配成大體系再分裝就會p不出來（可以確定加的試劑和量絕對不錯，與以前一樣），只配25的就能p出來，不過條帶有兩條，一條很亮，這條亮的條帶很近的下方可以看到另一條帶，較弱，但是很特異，而且跟那個亮的大小差不了多少，這是為什么？ 答：（1）什么大體系分到小體系PCR不出是不可能的，只有可能是你分裝的過程中的試劑盒手法出現(xiàn)點問題，排查一下吧。 （2）那是影子帶，常常出現(xiàn)，加入一定量的輔助劑有助于解決這個問題如BSA,Triton-X100，等等，具體可以查看《分子克隆實驗指南》一書。 |
2樓2010-11-16 13:00:06
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 zxyjenny6 的主題更新
| 2 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學調劑，求導師收 +8 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
[考研] 304求調劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 331環(huán)境科學與工程求調劑 +3 | 熠然好運氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調劑 +10 | jjjjjjjjjjl 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分調劑 +4 | 大饞小子 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調劑 +3 | 李嘉圖·S·路 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +5 | hanamiko 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑，一志愿 南京航空航天大學大學 ，080500材料科學與工程學碩 +4 | @taotao 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 351求調劑 +4 | 麥克阿磊 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調劑 +6 | wfh030413@ 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京郵電大學 288分 材料考研 求調劑 +3 | jl0720 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調劑 +4 | 15188958825 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料與化工303分求調劑 +4 | 為學666 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 318求調劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277分求調劑，跨調材料 +3 | 考研調劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|