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【求助/交流】使用TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit試劑盒克隆啟動(dòng)子的問題 已有1人參與
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使用TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit試劑盒克隆啟動(dòng)子時(shí)，遇到了很嚴(yán)重的自擴(kuò)現(xiàn)象，一輪彌散，二輪出現(xiàn)的條帶全部為C2或S2單引物對(duì)照自擴(kuò)條帶，這是什么原因造成的呢？如何解決該問題？謝謝！ （問題轉(zhuǎn)自百度知道） 我自己也用這個(gè)試劑盒做了很久，遇到同樣問題，PCR條件摸索了很多遍。最后沒轍，直接拿彌散帶連接，轉(zhuǎn)化，測(cè)序。發(fā)現(xiàn)克隆到的序列2邊引物都是C2（C2是對(duì)應(yīng)的接頭序列而設(shè)計(jì)的引物，Kit自帶）。也就是說，PCR的條帶是單引物P出來的。 打算試試巢擴(kuò)。可還是很不確定。 如果有用過這個(gè)試劑盒的最好啦。因?yàn)榘凑赵噭┖欣锏恼f明，理論上很難出現(xiàn)自擴(kuò)現(xiàn)象的。 |
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2樓2010-11-21 09:40:56
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