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熒光定量PCR,是相對定量相關(guān)問題請教。
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| 我現(xiàn)在正在做熒光定量PCR,是相對定量,用ΔΔCT法,新手,請問:到底兩品系的起始RNA量是不是要調(diào)成相同 |
木蟲 (小有名氣)

榮譽(yù)版主 (知名作家)
木蟲 (正式寫手)
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關(guān)鍵是要做平行,不是同一個(gè)樣本pcr,是不同實(shí)驗(yàn),不同批次處理的樣本要做初始定量的,做了定量,有意識(shí)的統(tǒng)一一下就行,加點(diǎn)水稀釋,簡單的很,至少三個(gè)樣本起。 不過貌似很多實(shí)驗(yàn)室的平行是一次實(shí)驗(yàn),3個(gè)加樣孔。。。初始定量也就失去了意義。 相對定量原則上與初始樣本之間的差異無關(guān), |
| 我聽我們實(shí)驗(yàn)室的人說是,要開始的時(shí)候RNA定量,反轉(zhuǎn)錄后的cDNA最好也定量。跑完之后內(nèi)參基因的Ct值相差不能大于一個(gè)循環(huán)。我現(xiàn)在在做相對定量,RNA濃度是一致了,可能是RNA的質(zhì)量不一致吧,內(nèi)參的循環(huán)差了快2個(gè)Ct值了。RNA調(diào)濃度的時(shí)候最好不要加水稀釋,直接測好濃度后取相應(yīng)的體積就行了。 |
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