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zhanglin_84木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】誰(shuí)會(huì)gene waling操作？能不能發(fā)一份完整的實(shí)驗(yàn)步驟、 已有9人參與
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各位大牛 誰(shuí)會(huì)gene walking操作？能不能發(fā)一份完整的實(shí)驗(yàn)步驟？ 您們一般用什么進(jìn)行引物設(shè)計(jì)？ 謝謝 [ Last edited by zhanglin_84 on 2010-11-21 at 10:04 ] |
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2樓2010-11-21 10:01:06
3樓2010-11-21 10:03:01
zhanglin_84
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2010-11-21 10:05:54
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amisking(金幣+4):good！ 2010-11-21 16:27:35
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amisking(金幣+4):good！ 2010-11-21 16:27:35
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富含GC你先不用考慮，先理解實(shí)驗(yàn)。 你看看這個(gè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)吧：http://www.docin.com/p-1308436.html 不過(guò)不建議你買takara的這個(gè)kit。我在用，效果不好~ 推薦用 BD UniversalGenomeWalker kit 這個(gè)會(huì)好很多！我的序列就是用這個(gè)拿的。說(shuō)明書(shū)網(wǎng)上有，你可以自己找來(lái)看。 takara是中文說(shuō)明書(shū)，你先看，理解下再看BD的，BD的是英文的，很詳細(xì)。原理差不多的，只是接頭片段設(shè)計(jì)思路和PCR策略不同。 你要拿側(cè)翼序列也可以用：inverse PCR ,Tail PCR 。 先理解原理，不要急著拿方案。 |
5樓2010-11-21 11:11:27
zhanglin_84
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6樓2010-11-21 12:39:02
zhanglin_84
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7樓2010-11-21 13:07:12
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amisking(金幣+2):good！ 2010-11-21 16:27:42
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常用那幾款軟件都行，你按kit要求來(lái)就好，沒(méi)什么難的。不放心多設(shè)計(jì)幾條。 建議：1，不要太靠近已知序列邊緣，這樣測(cè)序結(jié)果不好比對(duì)。 2，把特異性放在第一考慮的。這個(gè)實(shí)驗(yàn)雜帶相當(dāng)多。 如果設(shè)計(jì)引物不懂。。。那自己找教程吧。。。。 總之，不放心就多設(shè)計(jì)點(diǎn)，反正引物不貴，別把時(shí)間浪費(fèi)在引物上。其實(shí)已知序列可找的范圍最多1.5kb 。能對(duì)應(yīng)的好引物沒(méi)有幾條。你都設(shè)計(jì)了就好。 |
8樓2010-11-21 14:56:51
scienzyme
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9樓2010-11-21 20:14:28
10樓2010-11-21 21:00:08
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