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【求助/交流】求助兔子多抗的制備詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)器材和實(shí)驗(yàn)步驟！
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2樓2011-02-22 09:08:50
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dhd997(金幣+6): 熱心 2011-02-22 09:44:16
韓鋒紅巖(金幣+2): 2011-02-22 11:23:18
dhd997(金幣+6): 熱心 2011-02-22 09:44:16
韓鋒紅巖(金幣+2): 2011-02-22 11:23:18
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其實(shí)很多地方都有的，以下是我實(shí)習(xí)時(shí)用的教案，希望有所幫助。 實(shí)驗(yàn)一 免疫血清的制備 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br /> 熟悉免疫血清的制備過程； 了解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 將抗原物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)途徑，按照預(yù)先制定的免疫方案免疫動(dòng)物，經(jīng)過一定時(shí)間，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異抗體并釋放入血液，當(dāng)血中抗體達(dá)到一定效價(jià)時(shí)采血，分離血清，即為特異性免疫血清（又稱為抗血清）。因抗原具有多種表位，可激活多個(gè)克隆的B細(xì)胞活化產(chǎn)生抗體，因此，這種免疫血清又稱為多克隆抗體。 本實(shí)驗(yàn)以綿羊紅細(xì)胞（SRBC）作為免疫原，以家兔為免疫動(dòng)物，制備兔抗養(yǎng)紅細(xì)胞免疫血清（也稱為溶血素） 三、器材和材料 1.動(dòng)物 健康成年家兔，雄性，體重2-3kg；健康成年綿羊。 2.試劑 生理鹽水、碘酒、75%酒精。 3.器材 剪刀、鑷子、無菌注射器、量筒、無菌毛細(xì)滴管、無菌試管、離心管、三角燒瓶（200ml）、動(dòng)物固定架、手術(shù)器械一套、塑料放血管等。 四、 實(shí)驗(yàn)步驟 1.抗原制備 （1）用碘酒和75% 消毒綿羊皮膚，抽取頸靜脈血液，注入含有等量阿氏液的三角燒瓶內(nèi)，混勻。阿氏液既有抗凝作用，又適于儲(chǔ)存SRBC。分裝后置4℃冰箱內(nèi)，可使用3周。 （2）無菌取上述綿羊血于離心管中，用無菌生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，2000r/min，離心5min，吸棄上清液和白細(xì)胞層，再用無菌生理鹽水與SRBC混勻， 2000r/min，離心5min，重復(fù)3次。最后一次離心10min，以使血細(xì)胞沉積于管底，棄去上清液。 （3）根據(jù)紅細(xì)胞積壓，用生理鹽水配成20%SRBC懸液。 2.免疫動(dòng)物 （1）全班分為4組，每組選擇健康雄性兔1只，用于免疫。 （2）用全血和SRBC懸液按下述方案免疫兔子。 （3）試血 末次注射后第7天，耳靜脈采血1ml ,分離血清，用試管凝集試驗(yàn)滴定效價(jià)。（1：2000以上可用） 3、分離血清 （1） 頸動(dòng)脈放血（心臟采血）并收集于無菌三角燒瓶中凝固后4℃冰箱過夜，分離上層血清。然后2500r/min離心10min，收集收集上層血清。 （2）收集的血清經(jīng)鑒定純化后，小量分裝，-20℃凍存。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 收獲的血清應(yīng)無菌，且無溶血現(xiàn)象。兔抗SRBC免疫血清的溶血效價(jià)應(yīng)高于1：2000；兔抗人IgG免疫血清的效價(jià)應(yīng)高于1：16。 六、 注意事項(xiàng) 抗原制備、免疫動(dòng)物及采集血清等過程應(yīng)注意菌操作； 免疫的途徑、次數(shù)、間隔時(shí)間因抗原性狀不同而異，應(yīng)合理設(shè)計(jì)免疫方案，并更具具體情況加以調(diào)整； 再次注射免疫原時(shí)，要防治過敏反應(yīng)發(fā)生。 |
3樓2011-02-22 09:19:41
4樓2011-02-22 11:49:39
heenpeng5樓2013-07-26 13:39:09
6樓2013-12-13 09:58:30
7樓2015-03-25 00:40:17
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