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韓鋒紅巖

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[交流] 【求助/交流】求助兔子多抗的制備詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)器材和實(shí)驗(yàn)步驟！

求助兔子多抗的制備詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)器材和實(shí)驗(yàn)步驟！

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1樓 2011-02-21 15:48:32

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忘性大啊

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heenpeng

5樓2013-07-26 13:39:09

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qjy_134

實(shí)習(xí)版主

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你是自己準(zhǔn)備做還是要寫文章啊

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2樓2011-02-22 09:08:50

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小笨蛋次次

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dhd997(金幣+6): 熱心 2011-02-22 09:44:16
韓鋒紅巖(金幣+2): 2011-02-22 11:23:18

引用回帖:

Originally posted by 韓鋒紅巖 at 2011-02-21 07:48:32:
求助兔子多抗的制備詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)器材和實(shí)驗(yàn)步驟！

其實(shí)很多地方都有的，以下是我實(shí)習(xí)時(shí)用的教案，希望有所幫助。
實(shí)驗(yàn)一  免疫血清的制備
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br /> 熟悉免疫血清的制備過程；
了解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
將抗原物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)途徑，按照預(yù)先制定的免疫方案免疫動(dòng)物，經(jīng)過一定時(shí)間，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異抗體并釋放入血液，當(dāng)血中抗體達(dá)到一定效價(jià)時(shí)采血，分離血清，即為特異性免疫血清（又稱為抗血清）。因抗原具有多種表位，可激活多個(gè)克隆的B細(xì)胞活化產(chǎn)生抗體，因此，這種免疫血清又稱為多克隆抗體。
本實(shí)驗(yàn)以綿羊紅細(xì)胞（SRBC）作為免疫原，以家兔為免疫動(dòng)物，制備兔抗養(yǎng)紅細(xì)胞免疫血清（也稱為溶血素）
三、器材和材料
1.動(dòng)物  健康成年家兔，雄性，體重2-3kg；健康成年綿羊。
2.試劑  生理鹽水、碘酒、75%酒精。
3.器材  剪刀、鑷子、無菌注射器、量筒、無菌毛細(xì)滴管、無菌試管、離心管、三角燒瓶（200ml）、動(dòng)物固定架、手術(shù)器械一套、塑料放血管等。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1.抗原制備
（1）用碘酒和75% 消毒綿羊皮膚，抽取頸靜脈血液，注入含有等量阿氏液的三角燒瓶?jī)?nèi)，混勻。阿氏液既有抗凝作用，又適于儲(chǔ)存SRBC。分裝后置4℃冰箱內(nèi)，可使用3周。
（2）無菌取上述綿羊血于離心管中，用無菌生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，2000r/min，離心5min，吸棄上清液和白細(xì)胞層，再用無菌生理鹽水與SRBC混勻， 2000r/min，離心5min，重復(fù)3次。最后一次離心10min，以使血細(xì)胞沉積于管底，棄去上清液。（3）根據(jù)紅細(xì)胞積壓，用生理鹽水配成20%SRBC懸液。
2.免疫動(dòng)物
（1）全班分為4組，每組選擇健康雄性兔1只，用于免疫。
（2）用全血和SRBC懸液按下述方案免疫兔子。

（3）試血
末次注射后第7天，耳靜脈采血1ml ,分離血清，用試管凝集試驗(yàn)滴定效價(jià)。（1：2000以上可用）
3、分離血清
（1）  頸動(dòng)脈放血（心臟采血）并收集于無菌三角燒瓶中凝固后4℃冰箱過夜，分離上層血清。然后2500r/min離心10min，收集收集上層血清。
（2）收集的血清經(jīng)鑒定純化后，小量分裝，-20℃凍存。
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
  收獲的血清應(yīng)無菌，且無溶血現(xiàn)象。兔抗SRBC免疫血清的溶血效價(jià)應(yīng)高于1：2000；兔抗人IgG免疫血清的效價(jià)應(yīng)高于1：16。
六、注意事項(xiàng)
抗原制備、免疫動(dòng)物及采集血清等過程應(yīng)注意菌操作；
免疫的途徑、次數(shù)、間隔時(shí)間因抗原性狀不同而異，應(yīng)合理設(shè)計(jì)免疫方案，并更具具體情況加以調(diào)整；
再次注射免疫原時(shí)，要防治過敏反應(yīng)發(fā)生。

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3樓2011-02-22 09:19:41

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dianaofyezi

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網(wǎng)上有很多步驟介紹的，你看看就知道了。

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4樓2011-02-22 11:49:39

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