晴天8773

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[交流] 【求助/交流】求如何用96孔板做抗菌實驗及數(shù)據(jù)處理問題

求助各位大俠如何用96孔板做抗菌實驗？所得數(shù)據(jù)如何處理？
本人做法：
1，將0.5濁度的菌懸液，經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基1∶1000稀釋后，向每孔中加100μl。
2，將倍比稀釋后不同濃度的抗菌藥物溶液分別加到滅菌的孔板中，第3至第10孔加藥液，每孔100μl，其余各列加入相同體積的液體培養(yǎng)基，作為生長對照。酶標儀讀數(shù)。
3，過夜培養(yǎng)，酶標儀讀數(shù)。
現(xiàn)在不知道數(shù)據(jù)怎么處理，也不知道做法是否正確？
請各位大俠賜教。
本人化工專業(yè)，對生物一竅不通，求助了，謝謝各位。

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1樓 2010-11-21 22:40:14

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三磷酸腺苷

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

★ ★
dhd997(金幣+2):謝謝交流，還沒申請��？ 2010-11-22 08:29:29
晴天8773(金幣+9):謝謝�？紤]了孔板的邊緣效應，所以每列8個孔加的是相同的濃度，求出每列的均值之后，不知道怎么繼續(xù)處理了？抗菌率是實驗組的均值比上對照組的均值嗎？ 2010-11-22 08:51:05

復孔3~5個，求均值
先后重復三次實驗，同樣得均值
將3次均值再求均值及標準差
方差分析，根據(jù)需要作比較

“生長對照”加的是藥液的溶劑

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2樓2010-11-21 23:55:41

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晴天8773

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-21 23:55:41:
復孔3~5個，求均值
先后重復三次實驗，同樣得均值
將3次均值再求均值及標準差
方差分析，根據(jù)需要作比較

“生長對照”加的是藥液的溶劑

標準差及方差的數(shù)值代表什么意思？
加入材料為金黃色。經(jīng)過滅菌的液體培養(yǎng)基稀釋后不同濃度的材料顏色不同，吸光度不同，差別較大。
過夜培養(yǎng)后，每列的吸光度差別變小。
左邊六列數(shù)據(jù)如下：
（一）加入菌懸液、材料測定吸光度（原始數(shù)據(jù)）：
1菌懸液 2菌懸液 3材料原液 4稀釋2倍 5稀釋4倍 6稀釋8倍
A 0.298 0.296 0.574 0.462 0.396 0.372
B 0.307 0.295 0.714 0.564 0.503 0.436
C 0.310 0.309 0.542 0.528 0.443 0.413
D 0.301 0.304 0.654 0.559 0.498 0.453
E 0.298 0.296 0.574 0.462 0.396 0.372
F 0.307 0.295 0.714 0.564 0.503 0.436
G 0.310 0.309 0.542 0.528 0.443 0.413
H 0.301 0.304 0.654 0.559 0.498 0.453
（二）過夜培養(yǎng)之后測定吸光度（十二小時）：
1菌懸液    2菌懸液 3材料原液 4稀釋2倍 5稀釋4倍 6稀釋8倍
A 0.987    0.815 1.064 0.938 0.806 0.738
B 0.984    1.001 1.071 0.939 0.759 0.712
C 1.014    1.035 1.010 0.946 0.828 0.751
D 1.003    1.058 1.129 0.964 0.828 0.750
E 0.991    0.812 1.073 0.947 0.809 0.736
F 0.983    1.008 1.050 0.945 0.775 0.715
G 1.013    1.040 1.019 0.965 0.836 0.759
培養(yǎng)18小時、24小時后分別測定吸光度。
請教大俠，我怎么通過上面的數(shù)據(jù)求出抗菌率？

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3樓2010-11-22 09:13:31

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三磷酸腺苷

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

★ ★
lstt09nk(金幣+2):鼓勵交流~ 2010-11-22 11:21:10
晴天8773(金幣+8):大俠，能具體說說嗎?我的材料是非常均勻的液體，八千轉(zhuǎn)離心不沉淀。大腸桿菌沒有離心過，不知道離心時轉(zhuǎn)速在怎么控制，離心后菌群如何收集，請賜教。在線等，謝謝。 2010-11-22 14:42:58

我們暫時拋開什么統(tǒng)計方法不說
首先你的藥對吸光度影響就很大了，所以很難下結(jié)論了。
你得重新優(yōu)化你的實驗方法，比如測之前離心，收集菌體，去掉培養(yǎng)液，重新加培養(yǎng)基測吸光度

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4樓2010-11-22 11:15:58

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三磷酸腺苷

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+5):辛苦~ 2010-11-22 17:09:17
晴天8773(金幣+8):謝謝，那我還是用培養(yǎng)皿做吧，就是實驗的準確度不高。 2010-11-22 18:31:29

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-22 11:15:58:
能具體說說嗎?我的材料是非常均勻的液體，八千轉(zhuǎn)離心不沉淀。大腸桿菌沒有離心過，不知道離心時轉(zhuǎn)速在怎么控制，離心后菌群如何收集，請賜教。在線等，謝謝。 2010-11-22 14:42:58

材料就算是均勻的液體，也有可能影響吸光度。比濁法一般在OD600那里做吧
你可以看到，在初始時間點，加了材料的原液和稀釋液之后，吸光度上升了接近50%，就說明這個材料以及稀釋液會對吸光度有很大的影響了。而且不同的稀釋倍數(shù)，對于吸光度的影響還不一致，這就很難通過扣除的方法來做。除非你用雙波長來矯正，不知道能不能有什么改善。

大腸桿菌離心的話，可以試試8000*g~10000*g，棄包含材料的培養(yǎng)基，然后再用等量的培養(yǎng)基重懸均勻去測吸光度

有那種專門的板式離心機的
沒有的話就辛苦你一個孔一個孔吸出來做了………………

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5樓2010-11-22 17:08:31

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鄭江松

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★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖

我也是最近在做這方面的試驗啊，沒有師兄，全是一人看文獻走過來的，你的方法我都用來，多看看文獻吧。吸光度是解決不了問題的，樣品是有顏色的。

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6樓2011-10-21 19:51:15

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lancylxi

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

引用回帖:

5樓: Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-22 17:08:31
材料就算是均勻的液體，也有可能影響吸光度。比濁法一般在OD600那里做吧
你可以看到，在初始時間點，加了材料的原液和稀釋液之后，吸光度上升了接近50%，就說明這個材料以及稀釋液會對吸光度有很大的影響了。而 ...

如果是這樣的情況，他可以不可以考慮····先用小試管培養(yǎng)，完了到點了以后一起離心，倒掉含藥培養(yǎng)基，加入無藥培養(yǎng)基后，吸取200ul菌懸液加到96孔板里面去，然后加入相關(guān)試劑反應后，測OD

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7樓2018-08-16 11:06:25

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