 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3501 | 回復(fù): 11 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
lizh736銀蟲 (正式寫手)
|
[交流]
【分享】HPLC注意事項(xiàng)及常見問題的解決方法 已有11人參與
|
||||
|
HPLC使用注意事項(xiàng) 1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜 過濾)。 2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。 3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。 4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)沖 洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿 外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。 5.長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，因?yàn)榧兯组L霉。 6.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。 7.C18柱絕對不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。 8.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查 并清洗。清洗方法；①以異 丙醇作溶劑沖洗：②放在異丙醇中間用超聲波清 洗；⑧用10％稀硝酸清洗。 9.氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。 10.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動相 的清洗。 11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。 12.更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的 流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。 高效液相色譜常見故障的斷定及解決診狀 可能的原因 解 決 方 法 (一)保留時間變化 1.柱溫變化 柱恒溫，必要時需配置恒溫箱 2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 3.緩沖液容量不夠 用》25mmol/L的緩沖液 4.柱污染 每天沖洗柱 5.柱內(nèi)條件變化 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動相 6.柱快達(dá)到壽命 采用保護(hù)柱 (二)保留時間縮短 1.流速增加 檢查泵,重新設(shè)定流速 2.樣品超載 降低樣品量 3.鍵合相流失 流動相PH值保持在3"7.5檢查柱的方向 4.流動相組成變化 防止流動相蒸發(fā)或沉淀 5.溫度增加 柱恒溫 (三)保留時間延長 1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡 2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化 3.鍵合相流失 同前(二)3 4.流動相組成變化 同前(二)4 5.溫度降低 同前(二)5 (四) 出現(xiàn)肩峰或分* 1.樣品體積過大 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% 2.樣品溶劑過強(qiáng) 采用較弱的樣品溶劑 3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 5.進(jìn)樣器損壞 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 (五)鬼峰 1.進(jìn)樣閥殘余峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗 2.樣品中未知物 處理樣品 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜) 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) 每天新配,用抗氧化劑 5.水污染(反相) 通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水 (六) 基線噪聲 1.氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣,加柱后背壓 2.污染(隨機(jī)噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑 3.檢測器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈 4.電干擾(偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等) 5.檢測器中有氣泡 流動相脫氣,加柱后背壓 (七)峰拖尾 1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 2.峰干擾 清潔樣品,調(diào)整流動相 3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品 4.同前(四)4 同前(四)4 5.同前(四)3 5.同前(四)3 6.死體積或柱外體積過大 連接點(diǎn)降至最低,對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 7.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱 (八)峰展寬 1.進(jìn)樣體積過大 同(四)1 2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn) 4.檢測器時間常數(shù)過大 設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% 5.流動相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動相 6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器 7.保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫 8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至最小 9.樣品過載 進(jìn)小濃度小體積樣品 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) | 木蟲收藏 |
» 猜你喜歡
287求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
325求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
343求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
求調(diào)劑推薦 材料 304
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
316求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
351求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
349求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料學(xué)碩333求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
342求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
調(diào)劑求收留
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- HPLC定量問題－很奇怪
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 關(guān)于HPLC保留時間的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- HPLC定量分析的方法學(xué)考證問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 多年來收藏的液相色譜資料
已經(jīng)有1147人回復(fù)
- 【原創(chuàng)】HPLC常見問題原因及解決方案！
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助】HPLC空白對照問題求助
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【資源】液相色譜常見問題及處理方法
已經(jīng)有43人回復(fù)
羽扇綸巾
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 57.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.8小時
- 蟲號: 1174195
- 注冊: 2010-12-21
- 專業(yè): 細(xì)胞生理學(xué)
5樓2011-04-22 15:11:36
lzqa123
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 345
- 帖子: 10
- 在線: 52.6小時
- 蟲號: 1302490
- 注冊: 2011-05-21
- 專業(yè): 植物資源學(xué)
10樓2012-09-11 01:48:08
wenzi6337
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
- 金幣: 3267.6
- 散金: 196
- 紅花: 7
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 1364
- 在線: 413.8小時
- 蟲號: 716576
- 注冊: 2009-03-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
11樓2013-05-20 21:52:41
elsha
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 3.5
- 帖子: 6
- 在線: 2.8小時
- 蟲號: 2227818
- 注冊: 2013-01-07
- 專業(yè): 中藥質(zhì)量評價
12樓2013-09-26 21:55:43
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 325求調(diào)劑 +5 | 李嘉圖·S·路 2026-03-23 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +6 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境專碩324分求調(diào)劑推薦 +5 | 軒小寧—— 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工 264分各科過A區(qū)國家線 +6 | 哈哈157349 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 15188958825 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學(xué)初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | L when 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854人工智能方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +4 | 1124361 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +3 | YNRYG 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學(xué)，總分302，求調(diào)劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 22408 344分 求調(diào)劑 一志愿 華電計算機(jī)技術(shù) +4 | solanXXX 2026-03-20 | 4/200 |
|