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yangjunzju

木蟲 (正式寫手)


[交流] 【求助/交流】大腸桿菌越搖越清,怎么回事

如題,最近我搖了幾瓶大腸桿菌(重組菌,AMP抗性),OD600 nm能長到0.5,加入誘導(dǎo)劑后(兩種質(zhì)粒,分別用IPTG和阿拉伯糖誘導(dǎo)),發(fā)現(xiàn)半小時左右菌液開始變澄清,最后變成接近培養(yǎng)基顏色,里面有一些絮狀物的沉淀,不知道是不是菌體死亡的殘骸,但是繼續(xù)培養(yǎng)(過夜,>8h)又能長出來。。。繼續(xù)變混濁。。。這是什么原因呢,我百思不得其解。。還請各位指點。》浅8兄x~
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★ ★ ★
yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
dhd997(金幣+2):good 2010-11-30 15:07:51
烈性噬菌體污染后會將細菌裂解,導(dǎo)致培養(yǎng)液澄清。但根據(jù)lz描述的情況,應(yīng)該是染菌了。加入誘導(dǎo)劑之前你的目標(biāo)菌占優(yōu)勢,但加入誘導(dǎo)劑后可能誘導(dǎo)了對菌體有害的產(chǎn)物,導(dǎo)致細菌死亡,表現(xiàn)為培養(yǎng)液澄清。8h后,雜菌生長,表現(xiàn)為逐漸渾濁。

最直接的解決方法支持2樓
10樓2010-11-30 13:32:42
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普通回帖

leiyinwill

銀蟲 (小有名氣)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
前一段時間我就出現(xiàn)過類似的問題,師兄給我分析可能是因為染菌了。我就重新劃線,挑單克隆培養(yǎng),最后擴大培養(yǎng),每一步嚴(yán)格無菌操作,現(xiàn)在問題解決了。
2樓2010-11-30 12:05:34
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skkyy88888

銅蟲 (著名寫手)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
重新做吧。嚴(yán)格把關(guān)。
3樓2010-11-30 12:09:00
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Jeff_tian

木蟲 (著名寫手)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
反復(fù)測試
4樓2010-11-30 12:17:41
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yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
又沒有可能受到噬菌體污染?
5樓2010-11-30 12:26:53
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yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
有可能是由于某些原因誘導(dǎo)物加入后誘導(dǎo)菌體死亡了
后來長菌了可能是雜菌
6樓2010-11-30 12:30:28
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一碗水端平

木蟲 (職業(yè)作家)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
可能是噬菌體污染了
7樓2010-11-30 12:46:16
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林祎

木蟲 (正式寫手)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
噬菌體污染了,一般不會變澄清的
8樓2010-11-30 13:02:13
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★ ★ ★
yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
dhd997(金幣+2):good 2010-11-30 15:07:40
還有一個可能就是毒蛋白的表達,這和你的IPTG加入正好符合

加入后毒蛋白表達,導(dǎo)致細胞死亡或活力下降,等iptg消耗降解了,或者一些不表達蛋白的菌長起來,有重新渾濁了

沒看到具體情況,只能推測
9樓2010-11-30 13:30:39
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forestwarm

金蟲 (小有名氣)



yangjunzju(金幣+1):謝謝參與
肯定是噬菌體污染,曾經(jīng)有過這樣的事情
11樓2010-12-02 11:42:09
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鄧遠洪dyh

新蟲 (小有名氣)



小木蟲(金幣+0.5):給個紅包,謝謝回帖交流
好好觀察一下,如果有碎片,那基本上可以斷定是感染噬菌體了
12樓2010-12-02 17:20:37
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安安227

鐵蟲 (初入文壇)


引用回帖:
407912樓: Originally posted by silicare at 2010-11-30 13:30:39:
還有一個可能就是毒蛋白的表達,這和你的IPTG加入正好符合

加入后毒蛋白表達,導(dǎo)致細胞死亡或活力下降,等iptg消耗降解了,或者一些不表達蛋白的菌長起來,有重新渾濁了

沒看到具體情況,只能推測

iptg不參與代謝
13樓2012-05-16 00:37:00
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安安227

鐵蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
475136樓: Originally posted by forestwarm at 2010-12-02 11:42:09:
肯定是噬菌體污染,曾經(jīng)有過這樣的事情

既然是污染噬菌體,那為何后來又回變渾濁?
14樓2012-05-16 00:37:57
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
1965430樓: Originally posted by 安安227 at 2012-05-16 00:37:00:
iptg不參與代謝

你說的是理論上不參與微生物的生理代謝,但實際上作為試劑,本身就存在自身降解消耗和失效的問題,這才是實驗中最重要的優(yōu)化因素,不要讀死書,盡信書不如無書……
15樓2012-05-16 08:12:11
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forestwarm

金蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
1965431樓: Originally posted by 安安227 at 2012-05-16 00:37:57:
既然是污染噬菌體,那為何后來又回變渾濁?

后期變渾濁是由于,有一部分噬菌體整合到細菌上,成為了溶源性細菌,可以繼續(xù)繁殖呀,但隨時有再爆發(fā)的可能性。

» 本帖已獲得的紅花(最新10朵)

16樓2012-05-16 21:10:09
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安安227

鐵蟲 (初入文壇)


送鮮花一朵
引用回帖:
1965520樓: Originally posted by forestwarm at 2012-05-16 21:10:09:
后期變渾濁是由于,有一部分噬菌體整合到細菌上,成為了溶源性細菌,可以繼續(xù)繁殖呀,但隨時有再爆發(fā)的可能性。

謝謝,學(xué)習(xí)了!
17樓2012-05-17 10:23:05
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myloverlr

金蟲 (小有名氣)


應(yīng)該是噬菌體污染
18樓2012-06-27 10:44:50
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可蕊

鐵蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
樓主使用大腸桿菌是什么?有沒有測序過。我們實驗室也出現(xiàn)過這個現(xiàn)象,最后懷疑是大腸桿菌帶有噬菌體的基因引起的
19樓2013-03-10 15:07:19
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mhymhy1987

銀蟲 (初入文壇)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
請問你的問題解決了嗎 ?怎么解決的 我現(xiàn)在也出現(xiàn)這問題
20樓2013-05-29 16:55:30
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