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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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zplipeng

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[交流] 【求助/交流】Tris-Gly電泳緩沖液的pH值問(wèn)題（SDS-PAGE）

還原性不連續(xù)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)時(shí)，利用了不同的緩沖液pH值特點(diǎn)來(lái)達(dá)到更好的分離蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分離膠（pH8.8），濃縮膠（pH6.8），Tris-Gly緩沖液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly電極緩沖液配制時(shí)并沒(méi)有說(shuō)明要求調(diào)節(jié)pH至8.3，但是原理上分析是需要8.3的pH值的。
在實(shí)際的溶液配制時(shí)，卻發(fā)現(xiàn)5X緩沖液的pH值為8.7，問(wèn)一下各位是藥品的問(wèn)題么？各位有沒(méi)有親自測(cè)過(guò)pH值的，是不是需要調(diào)節(jié)到8.3再使用呢？

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rivers_123

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zplipeng(金幣+3): 2011-04-26 08:10:31

Tris-Gly調(diào)出來(lái)時(shí)8.3 合適，我們是10*的

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2樓2010-12-10 14:05:21

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zplipeng

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Originally posted by rivers_123 at 2010-12-10 14:05:21:
Tris-Gly調(diào)出來(lái)時(shí)8.3 合適，我們是10*的

這位的意思是說(shuō)：稀釋到1倍時(shí)，是8.3是么？？？

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3樓2010-12-11 08:59:28

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pidou213

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zplipeng(金幣+2): 2011-04-26 08:10:42

我還真的沒(méi)有測(cè)過(guò)呢，不過(guò)蛋白分開(kāi)得還不錯(cuò)

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4樓2010-12-11 09:09:20

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brightfuture01

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引用回帖:

Originally posted by zplipeng at 2010-12-08 17:40:58:
還原性不連續(xù)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)時(shí)，利用了不同的緩沖液pH值特點(diǎn)來(lái)達(dá)到更好的分離蛋白的目的。
分子克隆指南要求：
分離膠（pH8.8），濃縮膠（pH6.8），Tris-Gly緩沖液（pH8.3）
但是，在Tris-Gly電極緩沖液配 ...

呵呵，一般來(lái)說(shuō)不用調(diào)的，1*的大概就是8.3左右。當(dāng)然這跟你們所用水的pH也有一點(diǎn)關(guān)系。

汪家政的那本書(shū)上是說(shuō)不用調(diào)的，所以一直也不調(diào)。我們一次配20L的10*buffer，也沒(méi)有調(diào)。跑出來(lái)的圖也很漂亮。

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5樓2010-12-11 10:33:22

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tianhuijuan

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zplipeng(金幣+1): 2011-04-26 08:10:58

本人實(shí)驗(yàn)室常配的是5×電泳緩沖液，也沒(méi)調(diào)節(jié)過(guò)pH,圖也很好。

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6樓2010-12-11 16:56:47

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Originally posted by zplipeng at 2010-12-11 08:59:28:

這位的意思是說(shuō)：稀釋到1倍時(shí)，是8.3是么？？？

稀釋前后不變。

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7樓2010-12-11 16:58:13

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rainwander

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zplipeng(金幣+1): 2011-04-26 08:11:03

一直就沒(méi)有測(cè)過(guò)pH到底是多少，

只是直接配完稀釋用就行，

效果一樣很好

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8樓2010-12-12 00:33:10

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guang012345

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我們做的時(shí)候好像也是沒(méi)有調(diào)PH的，我用的也是5X的緩沖液

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9樓2011-01-14 22:06:22

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rivers_123

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★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖

是將10*調(diào)到8.3，然后跑膠用稀釋好的1*(900ddH2O+100母液）1h，轉(zhuǎn)得時(shí)候用1*Transfer 3h就可以了。但蛋白的分子量不同轉(zhuǎn)得時(shí)間也有差異，還有轉(zhuǎn)膜注意事項(xiàng)等，比如，大分子蛋白用厚膠轉(zhuǎn)時(shí)間就要長(zhǎng)些，嘿嘿

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10樓2011-09-21 18:54:52

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