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【求助】問一個很專的問題“免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)檢測海馬突觸素I表達”檢測方法 已有2人參與
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在文獻上看到： 將爬有原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元用PBS漂洗后，冰甲醇40℃固定10min；PBS洗片5 min×3次，加入10%羊血清，室溫孵育30min；吸棄羊血清封閉液，加入1:400稀釋的突觸素I，4℃孵育過夜；PBS洗片5 min×3次，滴加l:50稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗體IgG，避光室溫孵育2h；避光PBS洗片5min×3次，滴加PBS-甘油稀釋的DAPI，封片。激光共聚焦顯微鏡下觀察，LSCM激光共聚焦熒光斷層掃描成像系統(tǒng)采集圖像，進行疊加處理，合成FITC和DAPI共定位的突觸素I圖像。 個人感覺好像不對，不知道哪位老師做過這放面的實驗。給指點指點。 另外還有一個 免疫熒光雙標(biāo)法檢測海馬神經(jīng)元p-CREB的表達：常規(guī)操作制備冰凍切片，切片在10%山羊血清封閉液中室溫孵育lh后，同時加入兩種第一抗體為兔抗p-CREB(1:100)和小鼠抗NeuN(1:100)4℃濕盒孵育過夜，然后加入熒光二抗(羊抗兔IgG-TRITC l:50，羊抗小鼠IgG-FITC 1:50)室溫孵育2 h。每次抗體孵育后均用PBS漂洗，5 min×3次。最后用含有防淬滅劑的甘油/碳酸鹽緩沖液(l:l)封固，熒光顯微鏡進行觀察、拍片。病理圖像分析軟件計算神經(jīng)元染色積分光密度值(IOD值)，IOD值與p-CREB表達成正比，以IOD值反映p-CREB的表達。 這個個人感覺對，還請高手確認(rèn)，謝謝。 以上材料是參考一博士論文。 |
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2樓2010-12-17 12:06:31
qinhy
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3樓2010-12-19 15:33:26
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